معلومة

التأثير على فعالية وفعالية ارتباط مضاد غير تنافسي بالموقع النشط للمستقبل (منحنى الجرعة والاستجابة)

التأثير على فعالية وفعالية ارتباط مضاد غير تنافسي بالموقع النشط للمستقبل (منحنى الجرعة والاستجابة)



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

وفقًا لكتاب "مبادئ علم الأدوية: الأساس الفيزيولوجي المرضي للعلاج بالعقاقير" من تأليف جولان وآخرون ، يمكن للمضادات غير التنافسية الارتباط بكل من الموقع الخيفي والموقع النشط.

أعلم أن المضاد غير التنافسي الذي يرتبط بالموقع الخيفي يؤدي إلى انخفاض في الفعالية ، ولكن لا يوجد انخفاض في الفاعلية (انظر الشكل أدناه). يوضح الشكل (أ) الناهض وحده والناهض جنبًا إلى جنب مع الخصم التنافسي. يؤدي هذا إلى تحول منحنى الاستجابة للجرعة إلى اليمين ، وبالتالي زيادة EC50 وتقليل فاعلية الناهض. يوضح الشكل (ب) منحنى الاستجابة للجرعة للناهض وحده والناهض جنبًا إلى جنب مع مضاد غير تنافسي يرتبط بموقع خيفي. كما ترى ، يتسبب هذا النوع من المضاد في انخفاض الفعالية ، ولكن لم يلاحظ أي انخفاض في الفاعلية.

ولكن كيف يؤثر المضاد غير التنافسي الذي يرتبط بالموقع النشط على منحنى الاستجابة للجرعة؟ هل يؤدي إلى انخفاض في الفعالية والفعالية؟ للأسف ، لا يوجد رقم في الكتاب يجيب على سؤالي.


anwer قصير

يتم استدعاء "مثبطات ربط الموقع النشطة غير التنافسية" مثبطات من النوع المختلط. تعرض هذه المثبطات ميزات كل من المثبطات التنافسية وغير التنافسية ، حيث إنها تزيد Kم (مثل مثبط تنافسي) وتقليل Vالأعلى (مثل المانع غير التنافسي).
خلفية

يا له من سؤال مثير للاهتمام!

من الناحية النظرية ، يكون المثبط القابل للانعكاس المرتبط بالموقع النشط للإنزيم تنافسيًا وفقًا للتعريف. في مراجعة قام بها Blat (2010) ذكر المؤلف أن مثبطات ربط الموقع النشطة التي تعرض تثبيطًا غير تنافسي هي بالفعل غير عادية. يشار إلى هذه المثبطات باسم مثبطات من النوع المختلط. في كثير من الحالات ، لوحظ السلوك غير المعتاد باستخدام (1) الإنزيمات خارج لربط الركيزة ، أو (2) إنزيمات isomechanism، (3) إنزيمات مع ركائز / منتجات متعددة أندور (4) المنتجات ومثبطات الربط من خطوتين.

(1) الانزيمات مع اكسوسيت أن يكون لها موقع التعرف على الركيزة يختلف عن الموقع النشط. على سبيل المثال ، تقوم بعض البروتياز بربط هدفها على السطح الخارجي ثم تحفيز تحلل البروتين في الموقع النشط. ثم ترتبط مثبطات النوع المختلط بالخارج ، مما يؤدي إلى سلوك غير تنافسي ، حيث أن الموقع النشط غير ملزم.

(2) إنزيمات isomechanism هي إنزيمات تخضع لعدة تغييرات انتقالية هيكلية أثناء التحفيز. عندما يكون أحد هذه المطابقات محددًا للمعدل ويربط مثبطًا من النوع المختلط ، فإنه قد يثبط الإنزيم بشكل غير تنافسي عندما يرتبط شكل توافقي آخر بالركيزة.

(3) إنزيمات ذات ركائز أو منتجات متعددة تتبع أحيانًا ارتباطًا متسلسلًا وإطلاقًا لركائز (أو منتجات). افترض الركيزة A والعامل المساعد B (على سبيل المثال NADPH). يحول الإنزيم الركيزة أ إلى "أ" والعامل المساعد "ب" إلى ب ". افترض الآن أن الإنزيم الإلزامي يجب أن يحرر A "قبل B" ويمكن إطلاقه وأن الحالة B "المقيدة غير قادرة على ربط الركيزة A في الموقع النشط ، ولكنها قادرة على ربط مثبط النوع المختلط. في هذه الحالة ، مرة أخرى ، لوحظ نمط تثبيط غير تنافسي.

(4) مثبطات الربط من خطوتين تشير إلى المثبطات التي تسبب تغيرًا في تكوين الإنزيم بعد ربط مثبطه ، والذي يعود ببطء شديد إلى الوراء. في الحالة المتغيرة التوافقية ، لا يمكن للإنزيم ربط الركيزة وفقدان المنافسة مع الركيزة. الحالة الأكثر تطرفًا هي المثبطات التي ترتبط تساهميًا بالموقع النشط (لاحظ أن هذه هي الآلية التي تتناولهاRoverEye).

أنت تسأل ما هي الرسوم البيانية للجرعة والاستجابة لمثبطات من النوع المختلط. هناك طريقة أكثر شيوعًا لعرض سلوك المانع وهي استخدام مخططات Lineweaver-Burk. تتبع العديد من الإنزيمات حركية Michaelis-Menten (Berg et al. ، 2002) ومن خلال رسم حركية الإنزيم حيث يخطط Lineweaver-Burk لمزيد من التبصر في التقارب (كم، أنت تسمي هذا "الفاعلية") وأقصى معدل للإنزيم (الخامسالأعلى، أنت تسمي هذا "الفعالية") مقارنة بالرسوم البيانية للاستجابة للجرعة. في Lineweaver-Burk يرسم السرعة المتبادلة من الإنزيم ضد متبادل لتركيز الركيزة، مما يؤدي إلى خط مستقيم يمكن من خلاله الحصول على سرعة قصوى بسهولة عن طريق الانحدار الخطي.

تُظهر الرسوم البيانية التالية التي تم الحصول عليها من معهد إلينوي للتكنولوجيا أنماط التثبيط الثلاثة المختلفة التي تمت مناقشتها ، بدءًا من النوعين الشائعين:


زيادة مثبطات المنافسة كم (أي تقليل تقارب الركيزة).


المثبطات غير التنافسية تنخفض في ماكس (على سبيل المثال ، تقليل دوران الركيزة)


مثبطات النوع المختلط تزداد كم وتنقص في ماكس
مراجع
- بيرج وآخرون. (2002). الكيمياء الحيوية, 5ذ الإصدار
- بلاط ، تشيم بيول دروغ ديس 2010;75(6):535-40


هذا سؤال صعب. كنت أقرأ هذه الورقة باترونو ، سي ، وآخرون. "الصيدلة السريرية لتثبيط انزيمات الأكسدة الحلقية الصفائح الدموية." تداول 72.6 (1985): 1177-1184. ويبدو أنهم يذكرون هذه الفقرة في المقدمة.

إنزيم Cycloxygenase أو البروستاغلاندين (PG) H synthase (أي الإنزيم الذي يحول الأراكيدونات المنطلق من الغشاء الفسفوليبيد إلى PG endoperoxides) هو هدف للعديد من العوامل المضادة للصفيحات التي يمكن أن تمنع نشاط الإنزيم بشكل عكسي أو لا رجعة فيه عن طريق التنافس مع الركيزة أو بشكل دائم تغيير الموقع النشط ، على التوالي. تنتمي هذه الأدوية إلى فئة ما يسمى بالعوامل المضادة للالتهابات غير الستيرويدية (على سبيل المثال ، إندوميثاسين ، الأسبرين) ، ولكنها تشمل أيضًا عامل تحفيز حمض اليوريك ، أي سلفينبيرازون.

لذلك علينا أن نبحث عن جمهورية الكونغو الديمقراطية لمضادات الالتهاب غير الستيروئيدية لنقول كوكس. الآن لم أتمكن من العثور على ملف DRC جيد للأسبرين (إذا وجدته ، أخبرني في التعليقات أدناه. أود إلقاء نظرة عليه). لكنني وجدت DRC للأدوية الأخرى التي تثبط COX.

قادني إلى هذه الورقة ووكر إم وآخرون. "آلية حركية من ثلاث خطوات لتثبيط انتقائي لـ cyclo-Oxygenase-2 بواسطة مثبطات diarylheterocyclic." بيوتشيم. J 357 (2001): 709-718. التي وصفت مثبطات COX2 بواسطة مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية تسمى celecoxib.

إن تثبيط إنزيمات COX بواسطة مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية يتوافق بشكل عام مع واحدة من ثلاث آليات مثبطة: تثبيط عكسي بسيط ، كما يتضح من الإيبوبروفين. التثبيط العكسي المعتمد على الوقت ، والذي يتضمن كلاً من مثبطات الارتباط الأضعف ، مثل النابروكسين ، ومثبطات الربط المحكم ، مثل الإندوميتاسين وحمض ميكلوفيناميك ؛ والتثبيط التساهمي الذي لا رجعة فيه ، كما يتضح من الأسبرين و o- (أسيتوكسي-فينيل) هيبت -2-ينيل كبريتيد ('APHS'). تعرض معظم مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية التقليدية آليات مثبطة مماثلة لكل من COX-1 و COX-2 ، وهي غير انتقائية نسبيًا. ومع ذلك ، فإن مثبطات COX-2-انتقائية diarylheterocyclic تظهر آليات مثبطة مميزة لكلا الشكلين الإسفيني. على سبيل المثال ، تم الإبلاغ عن السيليكوكسيب ليكون مثبطًا تنافسيًا عكسيًا لـ COX-1 مع إظهار تثبيط لا رجعة فيه يعتمد على الوقت لـ COX-2.

بالنظر إلى البيان المميز ، أعتقد أنه يمكنك اعتبار منحنى COX1 بمثابة تثبيط تنافسي قياسي و COX2 على أنه تثبيط غير تنافسي. التغيير الناتج هو في الأساس شكل المنحنى نفسه (يتم إزاحته إلى اليمين).

تم الإبلاغ عن جمهورية الكونغو الديمقراطية هنا: تاكونيللي ، ستيفانيا ، وآخرون. "الانتقائية الكيميائية الحيوية لمثبطات COX-2 الجديدة في فحوصات الدم الكاملة لنشاط COX-isozyme." الأبحاث والرأي الطبي الحالي 18.8 (2002): 503-511.

ومن المثير للاهتمام أن الورقة الثانية (بقلم ووكر) وصفت أيضًا كيف (اقترح المؤلفون) حدوث الارتباط. قراءة ممتعة للغاية.


التأثير على فعالية وفعالية مضاد غير تنافسي مرتبط بالموقع النشط للمستقبل (منحنى الجرعة والاستجابة) - علم الأحياء

يرتبط هذا الفصل بأحد أهداف القسم C (i) من منهج CICM الأساسي لعام 2017 ، والذي يتوقع من مرشح الاختبار "تحديد وشرح علاقات الجرعة والتأثير للأدوية ، بما في ذلك منحنيات الجرعة والاستجابة بالإشارة إلى. إنه موضوع آخر في الديناميكا الدوائية يبدو مهمًا ، ويتمتع باختبارات مكثفة في عالم اختبارات علم التخدير الأساسي ، وقد تم تجاهله تمامًا في الانتخابات التمهيدية لـ CICM (على الأقل بين الأوراق المكتوبة المتاحة للجمهور).

لأغراض اجتياز بعض الحياة المستقبلية أو SAQ المكتوبة ، يمكن للمرء أن يقتصر بأمان على قراءة الأجزاء النهائية من فصل مارك فون زاسترو (الفصل 2) من علم الصيدلة الأساسية والسريرية (الطبعة الرابعة عشر ، أو أيًا كانت أحدث طبعة). لا حاجة لتفاصيل أبعد من ذلك. إذا كان المرء قادرًا على الحصول على نسخة ، فإن التعريفات الموجزة والأمثلة من Neubig et al (2003) ممتازة أيضًا.

  • ناهض: يجند يرتبط بمستقبل ويغير حالة المستقبل مما يؤدي إلى استجابة بيولوجية
    • ناهض كامل تصل إلى أقصى قدرة استجابة للنظام
    • ناهض جزئي لا تصل إلى قدرة الاستجابة القصوى للنظام حتى مع شغل المستقبل الكامل.
      • يعمل ناهض جزئي كمضاد في وجود ناهض كامل (إذا كانا يتنافسان على نفس المستقبلات)

      الديناميكا الدوائية

      الديناميكا الدوائية هي دراسة كيفية تأثير الأدوية على الجسم. الآلية الأكثر شيوعًا هي تفاعل الدواء مع مستقبلات الأنسجة الموجودة إما في أغشية الخلايا أو في السائل داخل الخلايا. مدى تنشيط المستقبل ، والاستجابة البيولوجية اللاحقة ، يرتبط بتركيز الدواء المنشط ("ناهض"). يتم وصف هذه العلاقة من خلال منحنى الجرعة والاستجابة ، الذي يرسم جرعة الدواء (أو التركيز) مقابل تأثيره. يمكن أن تتأثر هذه العلاقة الديناميكية الدوائية المهمة بعوامل المريض (مثل العمر والمرض) وبوجود أدوية أخرى تتنافس على الارتباط في نفس المستقبل (مثل "مضادات المستقبل"). تختلف بعض الأدوية التي تعمل في نفس المستقبل (أو الأنسجة) في حجم الاستجابات البيولوجية التي يمكنها تحقيقها (أي "فعاليتها") وكمية الدواء المطلوب لتحقيق الاستجابة (أي "فعاليتها"). يمكن تصنيف مستقبلات الأدوية على أساس استجابتها الانتقائية للأدوية المختلفة. يؤدي التعرض المستمر للمستقبلات أو أجهزة الجسم للأدوية أحيانًا إلى انخفاض الاستجابة (أي "إزالة التحسس").

      فهرس المعالجة

      عند استخدام الأدوية في الممارسة السريرية ، لا يتمكن الواصف من بناء منحنى دقيق للجرعة والاستجابة لكل مريض على حدة. لذلك ، يتم ترخيص معظم الأدوية للاستخدام ضمن نطاق الجرعة الموصى به والذي من المتوقع أن يكون قريبًا من الجزء العلوي من منحنى الجرعة والاستجابة لمعظم المرضى. وهذا يضمن أن معظم المرضى سيحققون استجابة سريرية جيدة دون الحاجة إلى المراجعة المتكررة وزيادة الجرعة. ومع ذلك ، هذا يعني أنه من الممكن أحيانًا تحقيق الاستجابة العلاجية المرغوبة بجرعات تقترب من الحد الأدنى من النطاق الموصى به (أو أقل).

      غالبًا ما تكون الآثار الضارة للأدوية مرتبطة بالجرعة بطريقة مشابهة للآثار المفيدة. من الممكن بناء منحنى الجرعة والاستجابة لهذه التأثيرات الضائرة بنفس الطريقة الموضحة للتأثيرات المفيدة ، مع الجرعات العالية المطلوبة عادة لإحداث التأثير الضار. تشير نقاط ED50 لكل منحنى في الشكل إلى أن النسبة بين الجرعات التي لها تأثيرات متناسبة مماثلة على النتيجتين هي 10 / 0.1 = 100. تُعرف هذه النسبة باسم "المؤشر العلاجي". في الواقع ، للأدوية تأثيرات ضائرة متعددة محتملة ، لكن مفهوم المؤشر العلاجي يقتصر عادةً على أولئك الذين يحتاجون إلى تقليل الجرعة أو التوقف عن تناولها. بالنسبة لمعظم الأدوية ، يكون المؤشر العلاجي أكبر من 100 ولكن هناك بعض الاستثناءات الملحوظة مع المؤشرات العلاجية أقل من 10 ، والتي هي شائعة الاستخدام (مثل الديجوكسين ، والوارفارين ، والأنسولين ، والفينيتوين ، والأفيونيات). إن الأدوية ذات المؤشرات العلاجية المنخفضة أكثر صعوبة في وصفها وخطورة بالنسبة للمرضى ولكنها لا تزال مفضلة إذا لم تكن هناك أدوية بديلة ذات فعالية مماثلة (مثل الأدوية المضادة للسرطان). يجب معايرة جرعات هذه الأدوية بعناية للمرضى الفرديين لتحقيق أقصى قدر من الفوائد ولكن تجنب الآثار الضارة. يتم ذلك عن طريق مراقبة تأثيرات الأدوية ، إما سريريًا أو باستخدام اختبارات الدم المنتظمة (المعروفة غالبًا باسم "مراقبة الأدوية العلاجية").

      شكل. منحنيات الجرعة والاستجابة للآثار المفيدة والضارة للدواء. سيهدف الواصفون إلى وصف الجرعات التي تزيد الفوائد إلى أقصى حد وتقليل الأضرار ، وهو أمر أسهل بالنسبة للعقاقير حيث تكون النسبة بين الجرعة المسببة للضرر وتلك التي تسبب فائدة ("المؤشر العلاجي") عالية.

      بالإضافة إلى تقديم تعريفات للمصطلحات للمتعلم (العتبة ، الفاعلية ، الفعالية) هناك وصف لكيفية الحصول على منحنيات الاستجابة للجرعة المتدرجة والكمية والمعلومات التي يمكن اشتقاقها من كل منها. يتم تضمين مناقشة المؤشر العلاجي فيما يتعلق بسلامة الدواء. هذا مناسب للمتعلم المبكر في علم الصيدلة.

      عند استخدام الأدوية في الممارسة السريرية ، لا يتمكن الواصف من بناء منحنى دقيق للجرعة والاستجابة لكل مريض على حدة. لذلك ، يتم ترخيص معظم الأدوية للاستخدام ضمن نطاق الجرعة الموصى به والذي من المتوقع أن يكون قريبًا من الجزء العلوي من منحنى الجرعة والاستجابة لمعظم المرضى. وهذا يضمن أن معظم المرضى سيحققون استجابة سريرية جيدة دون الحاجة إلى المراجعة المتكررة وزيادة الجرعة. ومع ذلك ، هذا يعني أنه من الممكن أحيانًا تحقيق الاستجابة العلاجية المرغوبة بجرعات تقترب من الحد الأدنى من النطاق الموصى به (أو أقل).

      غالبًا ما تكون الآثار الضارة للأدوية مرتبطة بالجرعة بطريقة مشابهة للآثار المفيدة. من الممكن بناء منحنى الجرعة والاستجابة لهذه التأثيرات الضائرة بنفس الطريقة الموضحة للتأثيرات المفيدة ، مع الجرعات العالية المطلوبة عادة لإحداث التأثير الضار. تشير نقاط ED50 لكل منحنى في الشكل إلى أن النسبة بين الجرعات التي لها تأثيرات متناسبة مماثلة على النتيجتين هي 10 / 0.1 = 100. تُعرف هذه النسبة باسم "المؤشر العلاجي". في الواقع ، للأدوية تأثيرات ضائرة متعددة محتملة ، لكن مفهوم المؤشر العلاجي يقتصر عادةً على أولئك الذين يحتاجون إلى تقليل الجرعة أو التوقف عن تناولها. بالنسبة لمعظم الأدوية ، يكون المؤشر العلاجي أكبر من 100 ولكن هناك بعض الاستثناءات الملحوظة مع المؤشرات العلاجية أقل من 10 ، والتي هي شائعة الاستخدام (مثل الديجوكسين ، والوارفارين ، والأنسولين ، والفينيتوين ، والأفيونيات). إن الأدوية ذات المؤشرات العلاجية المنخفضة أكثر صعوبة في وصفها وخطورة بالنسبة للمرضى ولكنها لا تزال مفضلة إذا لم تكن هناك أدوية بديلة ذات فعالية مماثلة (مثل الأدوية المضادة للسرطان). يجب معايرة جرعات هذه الأدوية بعناية للمرضى الفرديين لتحقيق أقصى قدر من الفوائد ولكن تجنب الآثار الضارة. يتم ذلك عن طريق مراقبة تأثيرات الأدوية ، إما سريريًا أو باستخدام اختبارات الدم المنتظمة (المعروفة غالبًا باسم "مراقبة الأدوية العلاجية").

      شكل. منحنيات الجرعة والاستجابة للآثار المفيدة والضارة للدواء. سيهدف الواصفون إلى وصف الجرعات التي تزيد الفوائد إلى أقصى حد وتقليل الأضرار ، وهو أمر أسهل بالنسبة للعقاقير حيث تكون النسبة بين الجرعة المسببة للضرر وتلك التي تسبب فائدة ("المؤشر العلاجي") عالية.

      هذا هو الرابع في سلسلة من 4 عمليات محاكاة تتعلق بعلاقات الاستجابة للجرعة. تركز هذه المحاكاة على المؤشر العلاجي. في هذه المحاكاة ، يمكن للمتعلم تغيير المؤشر العلاجي باستخدام شريط التمرير ومراقبة التأثيرات على المواضع النسبية لمنحنيات الاستجابة للجرعة للتأثيرات المرغوبة والضائرة. هذا نهج حركي أكثر لتوضيح هذه المفاهيم من حيث أنه يسمح للمتعلم بالتجربة. على الرغم من استهداف المتعلمين الأوائل في علم الصيدلة ، يجب أن يكون لدى الطلاب فهم أساسي للمفاهيم قبل استخدام المحاكاة.

      عند استخدام الأدوية في الممارسة السريرية ، لا يتمكن الواصف من بناء منحنى دقيق للجرعة والاستجابة لكل مريض على حدة. لذلك ، يتم ترخيص معظم الأدوية للاستخدام ضمن نطاق الجرعة الموصى به والذي من المتوقع أن يكون قريبًا من الجزء العلوي من منحنى الجرعة والاستجابة لمعظم المرضى. وهذا يضمن أن معظم المرضى سيحققون استجابة سريرية جيدة دون الحاجة إلى المراجعة المتكررة وزيادة الجرعة. ومع ذلك ، هذا يعني أنه من الممكن أحيانًا تحقيق الاستجابة العلاجية المرغوبة بجرعات تقترب من الحد الأدنى من النطاق الموصى به (أو أقل).

      غالبًا ما تكون الآثار الضارة للأدوية مرتبطة بالجرعة بطريقة مشابهة للآثار المفيدة. من الممكن بناء منحنى الاستجابة للجرعة لهذه التأثيرات الضائرة بنفس الطريقة الموضحة للتأثيرات المفيدة ، مع الجرعات العالية المطلوبة عادة لإحداث التأثير الضار. تشير نقاط ED50 لكل منحنى في الشكل إلى أن النسبة بين الجرعات التي لها تأثيرات متناسبة مماثلة على النتيجتين هي 10 / 0.1 = 100. تُعرف هذه النسبة باسم "المؤشر العلاجي". في الواقع ، للأدوية تأثيرات ضارة متعددة محتملة ولكن عادة ما يقتصر مفهوم المؤشر العلاجي على أولئك الذين يحتاجون إلى تقليل الجرعة أو التوقف عن تناولها. بالنسبة لمعظم الأدوية ، يكون المؤشر العلاجي أكبر من 100 ولكن هناك بعض الاستثناءات الملحوظة مع المؤشرات العلاجية أقل من 10 ، والتي هي شائعة الاستخدام (مثل الديجوكسين ، والوارفارين ، والأنسولين ، والفينيتوين ، والأفيونيات). إن الأدوية ذات المؤشرات العلاجية المنخفضة أكثر صعوبة في وصفها وخطورة بالنسبة للمرضى ولكنها لا تزال مفضلة إذا لم تكن هناك أدوية بديلة ذات فعالية مماثلة (مثل الأدوية المضادة للسرطان). يجب معايرة جرعات هذه الأدوية بعناية للمرضى الفرديين لتحقيق أقصى قدر من الفوائد ولكن تجنب الآثار الضارة. يتم ذلك عن طريق مراقبة تأثيرات الأدوية ، إما سريريًا أو باستخدام اختبارات الدم المنتظمة (المعروفة غالبًا باسم "مراقبة الأدوية العلاجية").

      شكل. منحنيات الجرعة والاستجابة للآثار المفيدة والضارة للدواء. سيهدف الواصفون إلى وصف الجرعات التي تزيد الفوائد إلى أقصى حد وتقلل من الأضرار ، وهو أمر أسهل بالنسبة للعقاقير حيث تكون النسبة بين الجرعة المسببة للضرر وتلك التي تسبب فائدة ("المؤشر العلاجي") عالية.

      تصف هذه المقالة المكونة من 400 كلمة تقريبًا معادلة الفهرس العلاجي مع أوصاف سهلة الفهم لكيفية تحديد ED50 و TD50 من العلاقات الكمية للجرعة والاستجابة. يتم تقديم العديد من الأمثلة على الأدوية ذات المؤشر العلاجي الضيق في النهاية.هذا مناسب للمتعلم المبكر في علم الصيدلة ولكن يجب أن يكون لديهم فهم لعلاقات الاستجابة للجرعة قبل عرض هذا المورد.

      انتقائية المستقبل

      تتم تسمية المستقبلات على أساس ناهضها الداخلي الرئيسي (مثل الأدرينالية ، السيروتونين ، الأفيون). ثم يتم عادةً "تصنيفها الفرعي" على أساس انتقائها للمنبهات أو الخصوم. يتم تحديد انتقائية الناهض من خلال نسبة EC50 لمنحنى الجرعة والاستجابة عند نوعي المستقبل الفرعيين المختلفين. على سبيل المثال ، يمكن تصنيف مستقبلات الأدرينالين β-بشكل فرعي إلى 1 و 2 ، على أساس استجابتها للنورادرينالين الناهض الداخلي. التركيز المطلوب للتسبب في توسع القصبات (عبر مستقبلات β2 الأدرينالية) أعلى بعشر مرات من التركيز المطلوب للتسبب في تسرع القلب (عبر مستقبلات β1 الأدرينالية). يمكن أيضًا تمييز الأنواع الفرعية للمستقبلات من خلال الفعالية النسبية للأدوية التي تقاوم تأثيرات ناهضها الكامل ، والتي تُقاس على أنها التحول النسبي لمنحنيات الاستجابة للجرعة الناهضة التي تحققت بواسطة جرعة واحدة من المضاد الذي يؤثر على الاستجابات التي يتم التوسط فيها من خلال المستقبلين . من المهم أن يتذكر الواصفون أن الانتقائية لنوع فرعي للمستقبل ما هي إلا مفهوم نسبي (أي أن الانتقائية لا تتساوى مع الخصوصية). يمكن للأدوية الناهضة أو المضادة التي تعتبر "انتقائية" لنوع فرعي لمستقبل واحد أن تنتج تأثيرات مهمة في الأنواع الفرعية الأخرى إذا تم إعطاء جرعة عالية كافية. هذا مهم بشكل خاص إذا كان أحد الأنواع الفرعية للمستقبل ينشط التأثيرات المفيدة بينما ينشط الآخر التأثيرات الضارة. على سبيل المثال ، الأدوية المثبطة لمستقبلات الأدرينالية "الانتقائية للقلب" لها تأثيرات مضادة للذبحة الصدرية على القلب (β1) ولكنها قد تسبب تشنج قصبي في الرئة (β2) وهي بطلان مطلق لمرضى الربو. الانتقائية مفيدة في الممارسة السريرية فقط عندما تكون نسبة تأثير الدواء في موقعي المستقبل 100 أو أكثر. عندما تكون الانتقائية أقل ، يصعب التنبؤ بجرعات الدواء التي ستستغل الاختلاف في نشاط النوع الفرعي.

      تتم تسمية المستقبلات على أساس ناهضها الداخلي الرئيسي (مثل الأدرينالية ، السيروتونين ، الأفيون). ثم يتم عادةً "تصنيفها الفرعي" على أساس انتقائها للمنبهات أو الخصوم. يتم تحديد انتقائية الناهض من خلال نسبة EC50 لمنحنى الجرعة والاستجابة عند نوعي المستقبل الفرعيين المختلفين. على سبيل المثال ، يمكن تصنيف مستقبلات الأدرينالين β-إلى فرعي 1 و 2 ، على أساس استجابتها للمنبه الداخلي ، النورأدرينالين. التركيز المطلوب للتسبب في توسع القصبات (عبر مستقبلات β2 الأدرينالية) أعلى بعشر مرات من التركيز المطلوب للتسبب في تسرع القلب (عبر مستقبلات β1 الأدرينالية). يمكن أيضًا تمييز الأنواع الفرعية للمستقبلات من خلال الفعالية النسبية للأدوية التي تقاوم تأثيرات ناهضها الكامل ، والتي تُقاس على أنها التحول النسبي لمنحنيات الاستجابة للجرعة الناهضة التي تحققت بواسطة جرعة واحدة من المضاد الذي يؤثر على الاستجابات التي يتم التوسط فيها من خلال المستقبلين . من المهم أن يتذكر الواصفون أن الانتقائية لنوع فرعي من المستقبلات هي مجرد مفهوم نسبي (أي أن الانتقائية لا تتساوى مع الخصوصية). يمكن للأدوية الناهضة أو المضادة التي تعتبر "انتقائية" لنوع فرعي لمستقبل واحد أن تنتج تأثيرات مهمة في الأنواع الفرعية الأخرى إذا تم إعطاء جرعة عالية كافية. هذا مهم بشكل خاص إذا كان أحد الأنواع الفرعية للمستقبل ينشط التأثيرات المفيدة بينما يقوم الآخر بتنشيط التأثيرات الضارة. على سبيل المثال ، الأدوية المثبطة لمستقبلات الأدرينالية "الانتقائية للقلب" لها تأثيرات مضادة للذبحة الصدرية على القلب (β1) ولكنها قد تسبب تشنج قصبي في الرئة (β2) وهي بطلان مطلق لمرضى الربو. تكون الانتقائية مفيدة في الممارسة السريرية فقط عندما تكون نسبة تأثير الدواء في موقعي المستقبل 100 أو أكثر. عندما تكون الانتقائية أقل ، يصعب التنبؤ بجرعات الأدوية التي ستستغل الاختلاف في نشاط النوع الفرعي.

      يستخدم مصطلح الانتقائية لوصف قدرة دواء ما على التأثير على جين معين ، أو بروتين ، أو مسار تأشير ، أو ما إلى ذلك ، في تفضيله على الآخرين. في البحث عن عوامل علاجية جديدة ، يُعتقد أن الانتقائية تتمتع بدرجة عالية من الرغبة. قد يكون المنطق الهدف الوحيد للتطور العلاجي معيبًا ، ومع ذلك ، قد يكون هناك توازن وتفاعل بين شبكات إشارات متعددة مما قد يؤدي إلى عواقب غير مقصودة. في مقال المناقشة هذا ، يصف المؤلفون أمثلة محددة في مناقشة القضايا المتعلقة بانتقائية الأدوية. ستكون هذه المقالة المكونة من 7 صفحات مناسبة للطلاب المتقدمين في علم الصيدلة الذين لديهم فهم شامل للديناميكيات الدوائية.

      الفعالية والفعالية

      الفعالية هي المصطلح المستخدم لوصف مدى قدرة الدواء على إنتاج استجابة عندما تكون جميع المستقبلات المتاحة أو مواقع الربط مشغولة (أي إيماكس على منحنى الجرعة والاستجابة). عند مقارنة الأدوية التي تعمل عند نفس المستقبلات ، فإن الناهض الكامل سيكون له أكبر فعالية ويمكن أن ينتج أقصى استجابة يمكن للمستقبل منها. ناهض جزئي في نفس المستقبل ، بحكم التعريف ، سيكون له فعالية أقل ، حتى عندما تكون جميع مواقع المستقبلات مشغولة. لا يقتصر مفهوم الفعالية على مقارنة تأثيرات الأدوية التي تعمل في نفس المستقبلات. يستخدم مصطلح الفعالية العلاجية لوصف مقارنة الأدوية التي تنتج نفس التأثيرات العلاجية على نظام بيولوجي ولكنها تفعل ذلك من خلال آليات دوائية مختلفة (مثل مدرات البول الحلقية والثيازيدية ومثبطات مضخة البروتون ومضادات H2). الفاعلية مصطلح يستخدم لوصف كمية الدواء المطلوبة لاستجابة معينة. تنتج الأدوية الأكثر فاعلية تأثيرات بيولوجية بجرعات أقل (أو تركيزات) ، مما يعني أن لديهم ED50 أقل (الشكل)

      شكل. منحنيات الاستجابة للجرعة للأدوية ذات الفاعلية العالية والمتوسطة والمنخفضة التي تعمل على نفس الهدف. لاحظ أن الدواء ذو ​​الفاعلية الأعلى لديه أقل فعالية والعكس صحيح.

      ترتبط فاعلية الدواء بأجواءه في المستقبل (أي مدى سهولة تكوين معقد مستقبلات الدواء). يمكن أن يكون للأدوية الأقل فاعلية فعالية مماثلة لتلك الخاصة بأدوية أكثر فاعلية ، يمكن التغلب على الاختلاف في الفاعلية بسهولة عن طريق إعطاء الدواء الأقل فاعلية بجرعات أعلى. يتضح هذا من خلال نطاقات الجرعات المختلفة الموصى بها من الأدوية التي تعمل في نفس الهدف الدوائي (مثل مضادات H2 ومثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين).

      عند الاختيار بين الأدوية ذات التأثيرات المفيدة المماثلة (مثل التسكين) من مجموعة من العقاقير المتشابهة ، قد يبدو من المنطقي اختيار الدواء ذي الفعالية العلاجية الأكبر. ومع ذلك ، في بعض الحالات ، قد يكون الدواء الأكثر فاعلية أقل تفضيلًا لأن نفس آلية العمل التي تؤدي إلى فوائد سريرية قد تكون أيضًا مسؤولة عن التسبب في آثار ضائرة تحد من الجرعة (على سبيل المثال ، المواد الأفيونية ، أدوية منع مستقبلات البيتا -1 الأدرينية). عندما يؤدي نفس الإجراء إلى تأثيرات مفيدة وضارة على حد سواء ، يمكن تقليل الأخير عن طريق زيادة (معايرة) الجرعة بعناية. ومع ذلك ، فإن بعض الأدوية لها منحنى أكثر حدة للجرعة والاستجابة ، مما يجعل من الصعب معايرة الجرعة الفعالة ولكنها تتجنب الآثار الضارة.

      نادرًا ما تكون فاعلية الدواء سببًا لاختيار واحد من بين مجموعة من الأدوية ذات التأثيرات العلاجية المفيدة المماثلة. وذلك لأن أي اختلافات في الفاعلية يمكن التغلب عليها ببساطة عن طريق إعطاء جرعات أعلى. على الرغم من أنه يمكن التغلب على الاختلافات في الفاعلية النسبية من خلال تغيير الجرعة ، يجب أن نتذكر أن معظم الآثار الضارة للأدوية مرتبطة أيضًا بالجرعة. قد تكون الفاعلية ذات صلة إذا حدثت بواسطة آلية أخرى غير تفاعل اللجند والمستقبل الذي يتوسط التأثير المفيد (لأن الدواء الأكثر فاعلية فقط هو الذي ينشط عند التركيزات التي تتجنب الآثار الضائرة غير المرغوب فيها).

      لهذه الأسباب ، لا تعني الفاعلية أو الفعالية الأكبر بالضرورة أن دواءً ما أفضل من دواء آخر. عند الحكم على المزايا النسبية للأدوية للمريض ، يجب على الواصفين أيضًا مراعاة العوامل المهمة الأخرى ، مثل المظهر الجانبي العام للتأثيرات الضارة ، والمؤشر العلاجي ، وسهولة الإعطاء للمريض ، ومدة التأثير (أي عدد الجرعات المطلوبة كل يوم) والتكلفة.

      هذه هي الثانية والثالثة في سلسلة من 4 عمليات محاكاة تتعلق بعلاقات الاستجابة للجرعة. تركز هاتان المحاكاة على الفاعلية والفعالية. في المحاكاة الأولى ، يمكن للمتعلم تغيير الفاعلية باستخدام شريط التمرير ومراقبة التأثيرات على منحنى اللوغاريتمات والاستجابة للجرعة. تسمح المحاكاة الثانية للمتعلم بتغيير الفعالية ومراقبة التغييرات. هذا نهج حركي أكثر لتوضيح هذه المفاهيم من حيث أنه يسمح للمتعلم بالتجربة. على الرغم من استهداف المتعلمين الأوائل في علم الصيدلة ، يجب أن يكون لدى الطلاب فهم أساسي للمفاهيم قبل استخدام المحاكاة.

      مقدمة في العلاقة بين الجرعة والاستجابة

      عندما يتم رسم العلاقة بين جرعة الدواء (المحور السيني) والاستجابة للعقار (المحور ص) على مقياس لوغاريتمي أساسي 10 ، ينتج عن ذلك منحنى استجابة الجرعة السيني (الشكل أ). يعتبر هذا التمثيل أكثر فائدة من الرسم البياني الخطي لأنه يوسع نطاق الجرعة في المنطقة التي تتغير فيها استجابة الدواء بسرعة ويضغط المقياس بجرعات أعلى حيث يكون للتغييرات الكبيرة تأثير ضئيل على الاستجابة. تشمل الاستجابات السريرية التي يمكن رسمها بهذه الطريقة التغيير في معدل ضربات القلب وضغط الدم ودرجة الحموضة في المعدة أو جلوكوز الدم ، بالإضافة إلى ظواهر أكثر دقة مثل نشاط الإنزيم ، وتراكم المرسل الثاني داخل الخلايا ، وإمكانية الغشاء ، وإفراز هرمون ، أو تقلص عضلة.

      تؤدي الزيادات التدريجية في جرعة الدواء إلى زيادة تأثيرات الدواء ، ولكن تحدث هذه الزيادات على مدى جزء ضيق نسبيًا من نطاق التركيز الكلي. الآثار السريرية لهذه العلاقة هي أن مجرد زيادة جرعة الدواء قد لا يؤدي إلى أي آثار مفيدة أخرى للمرضى وقد يسبب آثارًا ضائرة. يشار إلى أقصى استجابة على المنحنى باسم Emax والجرعة (أو التركيز) التي تنتج نصف هذه القيمة (Emax / 2) هي ED50 (أو EC50). يمكن اعتبار نطاق الجرعة الفعال على أنه يمتد إلى الجزء المستقيم لمنحنى الجرعة والاستجابة اللوغاريتمية (المقابل لـ 20-80٪ من إيماكس). الجرعة القصوى التي يمكن تحملها هي أعلى جرعة من الدواء يمكن تناولها دون حدوث آثار ضائرة مرتبطة بالجرعة.

      ستؤدي إضافة مضاد تنافسي إلى ناهض إلى حدوث تحول في منحنى الاستجابة للجرعة الناهضة إلى اليمين لأن تركيزات ناهض أعلى مطلوبة الآن لتحقيق نسبة معينة من شغل المستقبل (وبالتالي التأثير) (الشكل ب). منحنيات الاستجابة للجرعة من الناهض التي تم إنشاؤها في وجود جرعات متزايدة من الخصم التنافسي تنتقل تدريجياً إلى اليمين. ومع ذلك ، يمكن دائمًا التغلب على تأثير الخصم التنافسي القابل للانعكاس عن طريق إعطاء الناهض بتركيز عالٍ بدرجة كافية (أي أنه يمكن التغلب عليه). العديد من الأدوية المفيدة سريريًا هي مضادات تنافسية (مثل أتينولول ، نالوكسون ، أتروبين ، سيميتيدين). تمنع المضادات غير التنافسية تأثير ناهض بطرق أخرى غير المنافسة المباشرة لربط المستقبل بالناهض (على سبيل المثال عن طريق التأثير على نظام المرسل الثانوي). هذا يجعل من المستحيل تحقيق أقصى قدر من الاستجابة حتى مع تركيز ناهض مرتفع للغاية. عند تركيز معين ، لا تقوم المضادات غير التنافسية بتحويل منحنى الجرعة والاستجابة الناهضة إلى اليمين فحسب ، بل تقلل أيضًا من Emax (الشكل C). يمكن اعتبار الخصوم التي لا رجعة فيها شكلاً معينًا من أشكال الخصم غير التنافسي الذي يتميز بالعداء الذي يستمر حتى بعد إزالة الخصم. ومن الأمثلة الشائعة الأسبرين والأوميبرازول. يختفي هذا الشكل من العداء فقط عندما يتم تصنيع بروتينات أو إنزيم جديد. وهذا يفسر سبب فعالية الأسبرين ، حتى عند تناوله على فترات متقطعة ، كوقاية ضد أمراض القلب والأوعية الدموية.

      تختلف علاقة الجرعة والاستجابة لنفس الدواء بين الأفراد بسبب عوامل مختلفة ، مثل الاختلافات في عدد المستقبلات وبنيتها ، وآليات اقتران المستقبلات والتغيرات الفسيولوجية الناتجة عن الاختلافات في الجينات والعمر والصحة. على سبيل المثال ، غالبًا ما يتم تقليل تأثير مدرات البول العروية ، فوروسيميد ، بشكل كبير عند جرعة معينة في المرضى الذين يعانون من القصور الكلوي. مصدر آخر للتنوع هو أن نفس جرعة الدواء لا تحقق نفس تركيزات الأدوية في الأنسجة في جميع الأفراد بسبب الاختلافات في المناولة (مثل التمثيل الغذائي والإفراز). في الواقع ، هذا الاختلاف في الحرائك الدوائية هو الذي يفسر معظم التباين بين الأفراد في الاستجابة للأدوية في الممارسة السريرية.

      شكل. منحنيات الجرعة والاستجابة. أ. الميزات الأساسية. ب. تأثير التعاطي المشترك مع ناهض مع مضاد تنافسي. ج- تأثير إعطاء ناهض مع مضاد غير تنافسي. (لاحظ أنه في الواقع ، فإن تركيز اللجين (وما ينتج عنه من احتلال المستقبلات) هو الذي يؤثر على الاستجابة. عند مناقشة "منحنى الجرعة والاستجابة" ، غالبًا ما يُفترض أن جرعة الدواء وتركيز اللايجند مرتبطان ارتباطًا وثيقًا. ومن المحتمل أن يكون هذا الحالة أثناء تجربة دوائية في المختبر ، لكن العلاقة بين جرعة الدواء المبتلعة وتركيز الأنسجة ذات الصلة في الإنسان يمكن أن تكون أكثر تعقيدًا.)


      IC50 و كب قياسات & # x02013 & # x02018simulated "مثال البيانات

      ضع في اعتبارك المخطط الحركي الموضح في الشكل 1 أ. يعتمد المخطط على مخطط تفاعل ديل كاستيلو وكاتز (1957) البسيط ، الذي استخدم أولاً لوصف عمل أستيل كولين في مستقبلات أسيتيل كولين النيكوتين (قناة أيون ليجند النموذجية) الموجودة عند التقاطع العصبي العضلي. في المخطط ، يرتبط ناهض (A) بمستقبله (R) ليشكل معقدًا ناهضًا & # x02013receptor complex (AR). هناك خطوة أزمرة لاحقة للإشارة إلى الحالة النشطة (المفتوحة) للمستقبل (AR & # x0002a). المضمن في هذا المخطط هو الارتباط الحصري المتبادل للمضاد (B) بالمستقبل لإعطاء مستقبل غير نشط ومحظور (BR). يُشار إلى ثوابت التوازن ، التي تُعرّف على أنها معدل التفكك مقسومًا على معدل الارتباط ، بالنسبة إلى تفاعلات الارتباط الناهضة والمضادة بواسطة كأ و كب، على التوالي ، في حين أن ثابت التوازن لتفاعل الأزمرة ، ه، يتم تعريفه على أنه ثابت معدل الأمام (الافتتاح) مقسومًا على ثابت معدل الإغلاق (الإغلاق). في أي تركيز ناهض ومضاد معين (يشار إليه باسم (أ) و (ب) ، على التوالي) ، ستكون الاستجابة متناسبة مع النسبة ، صAR & # x0002a ، من المستقبلات في الحالة النشطة (AR & # x0002a). تعتمد هذه النسبة ، كما هو الحال بالنسبة لجميع تعبيرات التوازن ، فقط على نسبة التركيز إلى ثابت التوازن. لذلك ، من الملائم والمختصر كتابة النتائج من حيث التركيزات المعيارية المحددة على أنها

      للناهض والمضاد ، على التوالي.

      طرق حساب IC50 و كب قيم. (أ) مخطط رد الفعل ، استنادًا إلى آلية del Castillo & # x02013Katz ، والتي تتضمن الارتباط الحصري المتبادل لاثنين من الروابط المختلفة المشار إليها باسم A (ناهض) و B (مناهض). في هذا المخطط ، يمكن أن يوجد المستقبل في واحدة من ثلاث حالات غير نشطة & # x02013 غير منضم (R) ، مرتبطًا بالناشط (AR) ومقيد بالمضاد (BR) وحالة نشطة واحدة (AR & # x0002a). يتم إعطاء ثابت التوازن للربط الناهض بواسطة كأ، في حين يتم إعطاء ذلك للارتباط المضاد بواسطة كب. يتم الإشارة إلى ثابت التوازن لتفاعل الأزمرة بواسطة ه. بالنسبة لعمليات المحاكاة الموضحة في اللوحات المتبقية ، يتم استخدام ثوابت التوازن التالية: كأ=كب= 10 & # x02009& # x003bc م و ه= 10. تُظهر المؤامرة الموجودة أسفل مخطط التفاعل تركيز منحنى الاستجابة & # x02013 (من حيث إشغال حالة AR & # x0002a ، صAR & # x0002a ) التي سيتم الحصول عليها في حالة عدم وجود خصم. تتوقع أقصى استجابة (صالأعلى) من 0.909 و EC50 من أجل ناهض 0.909 & # x02009& # x003bc م. (ب) سلسلة من منحنيات التثبيط المتوقعة من مخطط التفاعل الموضح في (أ) ، مع تركيز ناهض طبيعي ، جأ، تم ضبطها لتكون مساوية لـ 0.1 و 0.3 و 1 و 3 و 10. لكل منحنى ، تم تطبيع الاستجابات للاستجابة القصوى المتوقعة (في حالة عدم وجود مضاد) لكل تركيز ناهض مستخدم. تشير الخطوط المتقطعة إلى IC المتوقع50 القيم التي سيتم الحصول عليها لكل تركيز ناهض. (ج) سلسلة من التركيز & # x02013 منحنيات الاستجابة التي تم توقعها من المخطط الموضح في (أ)، في غياب (منحنى أسود) ووجود (منحنيات ملونة) للمضاد. لاحظ أن زيادة تركيزات المضاد ينتج عنه تحول موازٍ إلى يمين التركيز & # x02013 منحنى الاستجابة ومع ذلك ، فإن الحد الأقصى للاستجابة التي يمكن تحقيقها يكون مكافئًا سواء كان المضاد موجودًا أم لا. تشير الخطوط المتقطعة إلى EC المتوقع50 القيم التي سيتم الحصول عليها في ظل كل حالة. (د) مؤامرة شيلد الناتجة عن تحليل البيانات الممثلة في (ج). نقاط البيانات (المرمزة بالألوان المقابلة لنسب الجرعة التي تم الحصول عليها من المنحنيات في (ج)) تقع على خط مستقيم ميله يساوي واحدًا. تقاطع هذا الخط مع الإحداثيات (المشار إليها بالخط الأفقي المتقطع) يعطي كب قيمة الخصم.

      يمكن كتابة هذه النتيجة (الاشتقاق الذي يظهر في الملحق) بشكل متساوٍ في شكل مختلف قليلاً مما يدل على أن الاستجابة تعتمد فقط على النسبة جأ/ (1 & # x0002bجب)، هكذا،

      يتميز هذا النموذج ، كما هو موضح أدناه ، بأنه يجعل من الواضح على الفور أن آليتنا يجب أن تمتثل لمعادلة شيلد حيث يمكن التغلب على الزيادة في تركيز المضاد عن طريق زيادة تركيز ناهض بعامل (1 & # x0002bجب).

      أقصى استجابة (صالأعلى) التي يمكن تحقيقها عندما يكون تركيز الناهض مرتفعًا بشكل غير محدود عن طريق التعبير

      وتركيز الناهض المطلوب للحصول على استجابة نصف قصوى (EC50) من خلال التعبير

      المفوضية الأوروبية50 في حالة عدم وجود الخصم كأ/ (1 & # x0002bه) ، وهذا يرتفع خطيًا مع زيادة تركيز المضاد ، بما يتناسب مع & # x02018 عامل الطفل '، (1 & # x0002bجب).

      في الشكل 1 ، يتم إنشاء التركيز & # x02013 منحنى الاستجابة الموضح أسفل مخطط التفاعل (حيث يتم ضبط تركيز الخصم على الصفر) عن طريق الإعداد كأ= 10 & # x02009& # x003bc م و ه= 10. لاحظ أن الحد الأقصى للاستجابة التي يمكن تحقيقها ليس 1 ، بل 0.909 (= 10/11 ، من المعادلة (4)) ، و EC50 القيمة التي سيتم ملاحظتها تساوي 0.909 & # x02009& # x003bc M (أي تركيز ناهض لاستحضار استجابة صAR & # x0002a =0.5صالأعلى=0.4545).

      يوضح الشكل 1 ب تأثير تغيير تركيز المضاد في وجود تركيز ثابت من ناهض (لهذه المحاكاة كأ=كب= 10 & # x02009& # x003bc م و ه= 10). هذه هي الطريقة المستخدمة لتوليد منحنيات التثبيط وتحديد تركيز المضاد الذي يقلل الاستجابة (في حالة عدم وجود المضاد) بمقدار محدد & # x02013 عادة 50 & # x00025 (IC50 القيمة). تظهر المنحنيات الاستجابات التي تم الحصول عليها عندما يكون تركيز ناهض ثابتًا عند 0.1 أو 0.3 أو 1 أو 3 أو 10 أضعاف كأ قيمة ناهض (أي ، جأ= 0.1 و 0.3 و 1 و 3 و 10 على التوالي). بالإضافة إلى ذلك ، تم تطبيع الاستجابات لأقصى استجابة يمكن الحصول عليها لكل تركيز ناهض في غياب المضاد & # x02013 هذه تتراوح من 0.476 (جأ= 0.1) حتى 0.901 (جأ= 10). تظهر الخطوط المتقطعة مكان IC50 ستكون القيمة لكل مجموعة من الشروط. لاحظ أن IC50 القيم في هذا المثال (وإن كان متطرفًا) تتراوح من 21 إلى 1110 & # x02009& # x003bc M ، وبدون وجود معلومات إضافية في متناول اليد ، لا تقدم تقديرًا جيدًا لـ كب القيمة (10 & # x02009& # x003bc م). لهذه الآلية ، فإن IC50 اعطي من قبل

      وهكذا ، فإن IC50 يجب أن يكون دائمًا أكبر من المطلوب كبوكلما زاد تركيز ناهض ثابت ، زاد الخطأ. في المقابل ، كما نوضح أدناه ، تعطي طريقة شيلد كب بحد ذاتها.

      يوضح هذا المثال نقطة مهمة جدًا حول كيفية قيام المرء بتحديد IC50 القيم & # x02013 تعتمد بشكل حاسم على تركيز ناهض المستخدم. لاحظ أنه بينما يوضح مخطط التفاعل الذي استخدمناه في هذا المثال العداء التنافسي ، IC50 يمكن أيضًا الحصول على قيم للخصوم الذين يتصرفون بطريقة غير تنافسية & # x02013 وبالتالي لا يخبروننا شيئًا عن طبيعة العداء قيد التحقيق. على الرغم من ذلك ، أو ربما بسبب هذا ، وحقيقة أن إنشاء منحنيات التثبيط والتقدير اللاحق لـ IC للمضاد50 القيمة هي عملية سريعة نسبيًا ، حيث يتم الإبلاغ عن منحنيات التثبيط بشكل أكثر شيوعًا من ضمان فائدتها (من حيث الفهم الآلي).

      على النقيض من ذلك ، فإن طريقة شيلد (Schild ، 1949 Arunlakshana and Schild ، 1959) للتحقيق في الفعل المضاد ليست مستقلة فقط عن طبيعة وتركيز المادة الناهضة المستخدمة لاستحضار الاستجابات ، ولكنها تخبرنا أيضًا ما إذا كانت الخصومة تنافسية أم لا. في الطبيعة ويسمح ، عند ملاحظة العداء التنافسي ، بتحديد ثابت التوازن لربط المضاد بمستقبله. ثابت التوازن هذا هو ثابت واحد محدد فيزيائيًا يميز المستقبل. تظهر طريقة إجراء تحليل شيلد في الشكل 1 ج و د. أول واحد يولد تركيز & # x02013 منحنى استجابة في حالة عدم وجود خصم (يظهر هذا على أنه المنحنى الأسود على الرسم البياني الموضح في الشكل 1 ج). بعد ذلك ، في ظل وجود سلسلة من زيادة تركيزات المضاد ، يتم الحصول على مزيد من مجموعات التركيز & # x02013 منحنيات الاستجابة (المنحنيات الملونة في الشكل 1 ج). لاحظ أن التنسيق في هذا الرسم البياني يرسم الاستجابة الفعلية & # x02018response (أي نسبة المستقبلات في AR & # x0002a من مخطط التفاعل الموضح في الشكل 1 أ) وليس استجابة طبيعية (كما هو الحال بالنسبة للتثبيط) المنحنيات في الشكل 1 ب). عند إجراء تحليل شيلد ، من الأفضل محاولة استخدام نطاق واسع من تركيزات المضاد للحصول على & # x02018 انزياح واضح في منحنيات التركيز الناهض & # x02013response ، وأيضًا لاختبار نطاق تركيزات المضاد التي يُرى السلوك التنافسي عليها . بعد ذلك ، يحتاج المرء إلى حساب ما يشار إليه بـ & # x02018 نسبة الجرعة '(ص). ببساطة ، هذا هو العامل الذي من خلاله يجب زيادة تركيز الناهض للحصول على نفس الاستجابة في وجود المضاد كما تم الحصول عليها في غيابه. الافتراض الذي تم التوصل إليه هنا هو أن نفس الجزء من المستقبلات يحتاج إلى التنشيط للحصول على نفس الاستجابة في غياب ووجود المضاد ، لكننا لا نحتاج إلى معرفة ماهية هذا الكسر. بوضع هذا من حيث مخطط التفاعل الموضح في الشكل 1 أ ، فإن هذا يعادل حل المعادلة التالية:

      حيث يعطي الجانب الأيمن حجم الاستجابة في حالة عدم وجود المضاد والجانب الأيسر يشير إلى العامل (نسبة الجرعة ، ص) التي من خلالها يجب زيادة تركيز ناهض للحصول على نفس الاستجابة. حل هذه المعادلة ببساطة ص= 1 & # x0002 بجب، بمعنى آخر.،

      وهذا ما يعرف بمعادلة شيلد. الشيء الجميل في هذه النتيجة الموضح في المعادلة (8) هو أنه ، على عكس IC50 (المعادلة (6)) ، فهي لا تنطوي على ناهض على الإطلاق ولا تتضمن مصطلح & # x02018 الفعالية ، ه.

      من الشائع ، في حالة توفر سلسلة من التركيز الكامل ومنحنيات الاستجابة # x02013 ، استخدام EC50 تركيز. تشير الخطوط المتقطعة إلى EC المعني50 قيم كل من المنحنيات وهنا مع مجموعة بياناتنا & # x02018perfect تساوي 0.909 و 1.182 و 3.636 و 10 & # x02009& # x003bc م. وبالتالي ، فإن نسب الجرعة المقابلة هي 1.3 و 4 و 11 على التوالي. في هذه المرحلة من العملية ، وإذا كان العداء تنافسيًا بطبيعته ، ينبغي للمرء أن يلاحظ: (1) تحولات متوازية إلى اليمين في منحنيات التركيز & # x02013 استجابة و (2) عدم حدوث انخفاض في الحد الأقصى للاستجابة التي يمكن تحقيقها. يصعب أحيانًا التأكد من هذه النقطة الأخيرة ، لأن إزالة حساسية المستقبلات وتسرع استجابة الأنسجة غالبًا ما تجعل من المستحيل الحصول على نفس الاستجابة القصوى. ومع ذلك ، فإن الانحراف الواضح عن التحولات المتوازية في منحنيات التركيز والاستجابة # x02013 والاكتئاب الكبير للاستجابة القصوى التي تم تحقيقها في وجود تركيزات متزايدة من المضاد يجب أن ينبه المجرب إلى أن العداء ليس منافسًا. للحصول على مناقشة شاملة لبعض الاعتبارات العملية التي يجب أخذها في الاعتبار عند إجراء تحليل شيلد ، انظر Kenakin (1984).

      في الشكل اللوغاريتمي ، تتم كتابة معادلة شيلد كـ

      وبالتالي (عندما تكون الخصومة تنافسية) سجل & # x02013log مؤامرة ص & # x022121 مقابل تركيز المضاد يعطي خطًا مستقيمًا بميل يساوي الوحدة (الشكل 1 د). يشار إلى هذه المؤامرات باسم مؤامرات شيلد. من المتوقع أن يكون منحدر مؤامرة شيلد وحدة و فقط عندما يكون الميل هو الوحدة ، فإن التقاطع على الإحداثي يعطي تقديرًا لـ كب قيمة المضاد. لذلك ، تتمثل أفضل الممارسات في ملاءمة نقاط البيانات بخط منحدر غير مقيد وتحديد ما إذا كان هذا يختلف اختلافًا كبيرًا عن الوحدة (على سبيل المثال ، انظر Colquhoun ، 1971). إذا كانت البيانات متوافقة مع تنبؤ معادلة شيلد ، فيجب إعادة تجهيز البيانات بخط مع ميله المقيد ليساوي واحدًا للحصول على كب من الخصم. بالمعنى الدقيق للكلمة ، فإن تقاطع الخط (مع الإحداثيات) ، الذي له ميل لا يساوي واحدًا ، يعطي تركيز المضاد الذي ينتج نسبة جرعة تساوي 2 ، & # x02212log10 والتي يشار إليها باسم صأ2 قيمة المضاد ، أي اللوغاريتم السالب للقاعدة 10 للتركيز المولي للمضاد الذي يجعل من الضروري مضاعفة تركيز ناهض للحصول على نفس الاستجابة (دون الحد الأقصى) التي تم الحصول عليها في غياب المضاد (شيلد ، 1947) . وبالتالي ، حتى بالنسبة للخصوم الذين لا يتصرفون بطريقة تنافسية ، يمكن إنشاء مؤامرات شيلد و صأ2 يمكن تحديد القيم & # x02013 فقط عندما تكون منحدرات هذه المؤامرات مساوية لواحد سوف يكون صأ2 تكون القيمة مساوية لـ & # x02212log10كب.

      على عكس سلسلة منحنيات التثبيط (الشكل 1 ب) ، ترجع مؤامرة شيلد الموضحة في الشكل 1 د كب قيمة المضاد. من خلال فحص معادلة شيلد ، يمكن للمرء أن يرى أنه لا توجد معلمة تعتمد على ناهض & # x02013 وبالتالي فإن تحليل شيلد مستقل عن ناهض بمعنى أن نفس الشيء كب سيتم الحصول على القيمة بغض النظر عن طبيعة الناهض المستخدم لتوليد تركيز ناهض & # x02013 منحنيات الاستجابة (بالطبع ، يجب على المرء استخدام نفس ناهض لكل مجموعة بيانات). هذه إحدى المزايا العظيمة لطريقة التحليل هذه. النهج البديلة (الانحدار غير الخطي) للحصول على كب تم الإبلاغ عن القيم ومناقشة مزاياها (على سبيل المثال ، انظر Lew and Angus ، 1995) ومع ذلك ، لأغراض هذه المراجعة ، فإننا مهتمون تحديدًا بتحديد وفائدة كب بدلا من IC50 القيم.


      ناهضات أفيونية المفعول ، ناهضات جزئية ، مناهضات: يا إلهي!

      تخرج الدكتور جيف فودين من كلية ألباني للصيدلة والعلوم الصحية بدرجة بكالوريوس وصيدلة. وهو دبلوماسي في أكاديمية الإدارة التكاملية للألم ، وزميل في ACCP ، و ASHP ، و FSMB ، وعضو في العديد من المنظمات المهنية الأخرى. وهو الرئيس التنفيذي لشركة Remitigate (remitigate.com) ، وهي شركة تطوير برمجيات سلامة المواد الأفيونية المحدودة. الدكتور فودين هو محرر قسم في Pain Medicine & amp Co_Editor-A-Large للإدارة العملية للألم. يمارس عمله كأخصائي صيدلة سريرية (WOC) ومدير برامج الإقامة في الصيدلة PGY-2 في المركز الطبي لإدارة ستراتون للمحاربين القدامى في ألباني ، نيويورك ولديه ارتباطات أكاديمية مع جامعة ويسترن نيو إنجلاند وكليات ألباني للصيدلة.

      نظرة على ارتباطات المستقبلات المختلفة التي تؤثر على التأثير المسكن.

      عندما يتعلق الأمر بالتنبؤ بالآثار العلاجية أو الضارة (والفعالية) ، تلعب الديناميكا الدوائية الخاصة بالمواد الأفيونية دورًا رئيسيًا. الديناميكيات الدوائية ، كما نعلم جميعًا ، هي دراسة ما يفعله الدواء بالجسم ، بما في ذلك المشاركة في ربط المستقبلات والتغيرات التوافقية التي تؤدي في النهاية إلى تأثيرات علاجية وغير علاجية (أي الآثار الضارة). بعض الآثار الضارة للمواد الأفيونية مذكورة في الجدول 1. 1

      الجدول 1. الآثار الضارة المرتبطة باستخدام المواد الأفيونية 1

      التأثيرات الضائرة الشائعة

      الآثار السلبية الشديدة

      انخفاض هرمون التستوستيرون / العجز الجنسي

      تثبيط الجهاز التنفسي الناجم عن المواد الأفيونية

      هناك 4 أنواع من المستقبلات الأفيونية التي تم تحديدها: مو ، دلتا ، كابا ، ومستقبلات أفيونية مثل 1 (ORL-1). يمكن تقسيم بعض المستقبلات إلى أنواع فرعية. هذه المستقبلات مهمة للتعبير عن انتقال الألم وتعديل المسارات ، بما في ذلك النقل العصبي في الجهاز الحوفي ، والدماغ المتوسط ​​، والحبل الشوكي ، والمهاد. توجد مستقبلات المواد الأفيونية في كل مكان في الجسم ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الجهاز الهضمي (GI) ، والخلايا المناعية ، والغدة النخامية ، والجلد. في هذه المواقع ، تقوم المستقبلات الأفيونية بوظائف متغيرة مسكنة وغير مسكنة. يتم سرد ملخص للتأثيرات الدوائية والفسيولوجية لكل مستقبلات أفيونية المفعول الجدول 2. 2-4

      طاولة. 2. تلخيص آثار مستقبلات الأفيون الفردية 2-4

      التأثيرات السريرية

      تعديل مستقبلات mu

      معظم المواد الأفيونية هي ناهضات مو ذات نشاط متفاوت على مستقبلات كابا.

      مستقبلات المواد الأفيونية هي 7 بروتينات عبر الغشاء تمتد إلى بروتينات G المثبطة. عندما يتم تنشيطها ، فإنها تقلل من إنتاج الأدينيل سيكليز من المرسل الثانوي أحادي فوسفات الأدينوزين الدوري. يؤدي هذا إلى انخفاض في تدفق الكالسيوم من تثبيط قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ويؤدي إلى تنشيط قنوات البوتاسيوم ، مما يؤدي إلى فرط الاستقطاب. تؤدي حالة فرط الاستقطاب إلى تثبيط الإشارات العصبية ، والتي تمنع انتقال الألم في هذه الحالة. 2،5

      يتم تصنيف المواد الأفيونية إلى فئات ، اعتمادًا على ارتباط المستقبلات وتقاربها (الجدول 3). هذه التصنيفات هي ناهض ، ناهض جزئي ، ومضاد. هناك مواد أفيونية لها وظائف ناهضة ومناهضة مزدوجة.

      الجدول 3. أمثلة على المواد الأفيونية من خلال ربط المستقبلات

      ناهض كامل

      ناهض جزئي

      ناهض مختلط

      ترتبط المنبهات الكاملة بإحكام بالمستقبلات الأفيونية وتخضع لتغييرات توافقية كبيرة لإنتاج أقصى تأثير. من أمثلة المواد الناهضة الكاملة الكوديين والفنتانيل والهيروين والهيدروكودون والميثادون والمورفين والأوكسيكودون.

      الناهضات الجزئية تسبب تغيرًا أقل في التوافقية وتنشيطًا للمستقبلات من الناهضات الكاملة. في الجرعات المنخفضة ، قد توفر كل من الناهضات الكاملة والجزئية تأثيرات مماثلة لأبناء عمومتهم الناهضة الكاملة. ومع ذلك ، عندما تزداد جرعة الناهضات الجزئية ، فإن النشاط المسكن سوف يستقر ، ولن توفر الزيادات الإضافية في الجرعات راحة إضافية ولكنها قد تزيد من الآثار الضارة. من أمثلة الناهضات الجزئية البوبرينورفين والبوتورفانول والترامادول.

      هناك ناهضات / مناهضات مختلطة ، والتي تُظهر نشاطًا متفاوتًا اعتمادًا على مستقبلات الأفيون ولكن تختلف أيضًا حسب الجرعة. تشمل الأمثلة البوبرينورفين والبوتورفانول والنالبوفين والبنتازوسين. وبعض المواد الأفيونية هي ناهضات عند مستقبل واحد أو أكثر من المستقبلات الأفيونية ولكنها أيضًا مناهضة لمستقبلات الأفيون الأخرى. يمكن العثور على ملخص لتأثيرات المستقبلات للمنبهات / المضادات في الجدول 4. 4

      الجدول 4. تأثير مستقبلات ناهض / مناهضات أفيونية مختلطة 4

      بنتازوسين

      البوبرينورفين

      بوتورفانول

      البنتازوسين حاصل على موافقة إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) ومخصص للتحكم في الألم ومصنوع من عقار الاسيتامينوفين أو النالوكسون. آلية العمل هي ناهض جزئي في مستقبلات mu الأفيونية و ناهض كامل في مستقبلات kappa الأفيونية. على الرغم من أن البنتازوسين يعادي بشكل ضعيف التأثيرات المسكنة للناهضات الكاملة ، إلا أنه يولد أيضًا انعكاسًا غير كامل للاكتئاب السلوكي والقلب والأوعية الدموية والجهاز التنفسي الناجم عن المورفين والمنبهات الكاملة الأخرى. 6

      نالبوفين Nalbuphine هو مسكن أفيوني اصطناعي يوضح نشاط ناهض في مستقبلات كابا ، بينما يعمل كمضاد لمستقبل مو. نالبوفين له تأثير سقف على تثبيط الجهاز التنفسي بجرعات أكبر من 30 ملغ. تم الإبلاغ عن Nalbuphine لعكس تثبيط الجهاز التنفسي ولكن ليس التسكين من ناهضات mu. 7،8 نالبوفين قد يعجل بالانسحاب في المرضى الذين يعتمدون جسديًا على ناهضات ميو أفيونية المفعول. 9

      يشار إلى البوبرينورفين بجرعات عالية لاضطراب استخدام المواد الأفيونية بينما يتم تناول جرعات أقل بشكل عام لعلاج الآلام المتوسطة والشديدة. تشمل تركيبات البوبرينورفين المعتمدة من إدارة الغذاء والدواء والمشار إليها لإدارة الألم Belbuca و Buprenex و Butrans. 10-12 تركيبات البوبرينورفين المعتمدة للاعتماد على المواد الأفيونية هي Bunavail و Probuphine و Suboxone و Subutex و Zubsolv. 13-17 البوبرينورفين أقوى 25 إلى 100 مرة من المورفين. 18 يُظهر البوبرينورفين سلوكًا ناهضًا جزئيًا في مستقبلات mu ويظهر سلوكًا مضادًا في مستقبلات كابا. يمتلك البوبرينورفين تقاربًا قويًا مع مستقبلات mu مما يسبب ارتباطًا وثيقًا وبالتالي منافسة في المستقبل ، مما يؤدي إلى إزاحة المواد الأفيونية الأخرى ، مثل الميثادون والمورفين. أيضًا ، هناك انفصال غير كامل عن مستقبلات mu ، مما يتسبب في نشاط طويل الأمد في المستقبل. 18 يتم قياس التقارب باستخدام قيم Ki ، وكلما كانت قيمة Ki أصغر ، كان تقارب الارتباط أقوى بالمستقبل. يمكن العثور على تقارب ربط مو للبوبرينورفين مقارنة مع المواد الأفيونية الأخرى في الجدول 5. من الجدير بالذكر أن البوبرينورفين لديه ألفة ارتباط أعلى مقارنة مع النالوكسون ، وبالتالي عند الجرعات العالية حيث من المرجح أن يتم إساءة استخدام البوبرينورفين ، ولا يتم عكسه بسهولة بواسطة النالوكسون. إنه فقط عند الجرعات المنخفضة حيث يكون هناك بعض الارتباط التنافسي ، وعندها فقط يجب أن نتوقع بعض الانعكاس بجرعات عالية من التسريب المستمر للنالوكسون. هذا ، بالطبع ، يطرح السؤال المتعلق بفائدة المنتج المشترك ، Suboxone.

      الجدول 5. تقاربات مستقبلات Mu لمختلف المواد الأفيونية 19

      نطاق من قيمة كي

      ليفورفانول

      البوبرينورفين

      0.4 إلى 0.6 (تأثيرات خصم) 20

      1 إلى 3 (التأثيرات المضادة) 20

      بنتازوسين

      بسبب الالتهاب الجزئي ، فإن التأثيرات على هضاب الاكتئاب التنفسي مع الجرعات المتزايدة ، مما يجعل هذا خيارًا قابلاً للتطبيق لأولئك المعرضين لخطر متزايد من الإصابة بالاكتئاب التنفسي. 21 لعداء مستقبلات Kappa فوائد في تقليل سلوك البحث عن المخدرات الناجم عن الإجهاد ، بسبب الانسداد اللاحق للدينورفين. Dynorphins عبارة عن ببتيدات أفيونية انتقائية لمستقبلات كابا تؤدي إلى القلق والتوتر وزيادة الرغبة في استخدام المواد الأفيونية. علاوة على ذلك ، أظهر عداء كابا خصائص مضادة للاكتئاب. 22،23

      بوتورفانول هو مضاد أفيوني مو ذو نشاط جوهري منخفض و ناهض أفيوني كابا يظهر تقاربًا عاليًا. يشار إلى بوتورفانول لإدارة الألم للمرضى الذين تكون خيارات العلاج البديلة فيها غير فعالة ، أو غير مقبولة ، أو غير كافية ، ويتم تركيبها على شكل رذاذ وحقن للأنف. بسبب التقارب العالي لمستقبلات كابا ، قد يسبب تأثيرات نفسية. في الجرعات العالية ، لا يزداد حجم تثبيط الجهاز التنفسي بشكل ملحوظ مثل معظم ناهضات / مناهضات مختلطة. ومع ذلك ، فإن مدة الاكتئاب التنفسي أطول ، بسبب الاستجابات الفسيولوجية السائدة بوساطة مو على كابا. 23-25

      ترتبط ناهضات الأفيون أيضًا بمستقبلات الأفيون المحيطية في الجهاز الهضمي ، مما يتسبب في ضعف الحركة والإفراز ، مما يؤدي إلى الإمساك. تعمل مضادات مستقبلات أفيونية المفعول المحيطية (بامورا) على وجه التحديد في الجهاز الهضمي لمكافحة الإمساك. ومع ذلك ، فإن مضادات الأفيون المحيطية لا تعبر الحاجز الدموي الدماغي ، وبالتالي تتجنب الحصار المفروض على التسكين المركزي والتأثيرات المناهضة للأفيون التي تتوسط مركزيا. تشمل أمثلة PAMORAs ألفيموبان (إنتيرج) وميثيل نالتريكسون (ريليستور) ونالوكسيجول (موفانتيك). الأخير 2 موصوف من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية للإمساك الناجم عن المواد الأفيونية بشكل عام بعد فشل الملينات التي تصرف بدون وصفة طبية. ومع ذلك ، يشار إلى Alvimopan للإدارة المحيطة بالجراحة للعلوص بعد العملية الجراحية لتسريع الوقت لاستعادة الجهاز الهضمي العلوي والسفلي بعد الجراحة. علاوة على ذلك ، على عكس جميع منتجات PAMORAs الأخرى ، يحتوي Alvimopan على تحذير من الصندوق الأسود للمخاطر المحتملة لحدوث احتشاء عضلة القلب مع الاستخدام طويل المدى ، وهو ليس خطرًا معترفًا به مع PAMORAs الأخرى. 26-28

      أخيرًا ، كما في كل قصة رائعة ، هناك أعداء. ومع ذلك ، في قصة المواد الأفيونية ، قد تنقذ مضادات الأفيون الأرواح. النالتريكسون هو مضاد أفيوني يمنع آثار المواد الأفيونية من خلال الارتباط التنافسي. يشار إلى النالتريكسون للاعتماد على الكحول والمواد الأفيونية وهو مفيد لأن حصار مستقبلات الأفيون يقلل بشكل ثانوي من نشاط الدوبامين الذي يعززه الكحول. 29 النالوكسون هو مضاد لمستقبلات ميو-أفيونية المفعول وعامل انعكاسي يستخدم للتخفيف من مخاطر تثبيط الجهاز التنفسي الناجم عن المواد الأفيونية عن طريق استبدال ناهضات الأفيون الكاملة.التركيبات المتاحة هي ناركان (أنفي) ، إيفزيو (حاقن تلقائي) ، ومحلول للحقن ، وكثيرًا ما يُعطى هذا الأخير خارج الملصق عن طريق الأنف ، عن طريق إرفاق رذاذ بطرف المحقنة. يُسمح لـ 30،31 من أفراد الأسرة والأصدقاء والمارة بالإدارة الآن في معظم الولايات (المحمية بموجب قوانين Good Samaritan) ، بالإضافة إلى المستجيبين الأوائل المحترفين ، مثل المسعفين.

      على الرغم من تحديد الكيمياء الكامنة وراء المواد الأفيونية ، إلا أن هناك معايير أخرى تحتاج أيضًا إلى أخذها في الاعتبار لتحديد الاستجابة الفردية. وتشمل هذه العوامل العمر ، والأمراض المصاحبة ، وشدة المرض ، والجنس ، وعلم الوراثة ، والوزن ، وكلها قد تؤثر إيجابًا أو سلبًا على استجابة الدواء. بالإضافة إلى الديناميكيات الدوائية الموضحة هنا ، فإن العديد من المواد الأفيونية الاصطناعية لها آليات عمل إضافية ، مثل حصار إعادة امتصاص النورأدرينالية وتثبيط مستقبلات n-methyl-D-aspartase (NMDA). لهذا السبب ، كما هو مذكور خطأً في إرشادات CDC الحديثة ، فإن الفشل و / أو عدم التسامح مع مادة أفيونية واحدة لا يعني بالضرورة الفشل في مادة أخرى. لذلك من المهم مراعاة كل هذه المتغيرات عند اتخاذ القرارات التي تؤثر على اختيار المواد الأفيونية أو التوقف عنها.

      هذه المقالة هي العمل الوحيد للمؤلفين ولا تعكس الآراء / التأكيدات المذكورة رأي أصحاب العمل والشركات التابعة للموظفين و / أو شركات الأدوية المدرجة.

      ريبيكا تشو مرشحة في برنامج دكتور صيدلة ، مع التركيز على الاقتصاد والنتائج الصحية في كلية ألباني (نيويورك) للصيدلة والعلوم الصحية.

      ألكسندرا سياني طالبة دكتوراه في كلية الصيدلة بجامعة ويسترن نيو إنجلاند في سبرينغفيلد ، ماساتشوستس. هي متدربة في الصيدلة في صيدلية هانافورد سوبر ماركت في روتردام ، نيويورك.

      مينا رؤوف ، دكتور صيدلة ، هي طبيبة مقيمة في مجال الرعاية التلطيفية والألم PGY-2 في مركز ستراتون فيرجينيا الطبي في ألباني ، نيويورك. أكمل إقامته في PGY-1 في VA Tennessee Valley Healthcare System في ناشفيل وحصل على دكتور صيدلة من كلية ألباني (نيويورك) للصيدلة والعلوم الصحية.


      استنتاج

      Threonine 244 عبارة عن بقايا مائية مع مجموعة وظيفية من السلسلة الجانبية موجهة نحو جانب الربط. تنبأت دراسات الالتحام GABA أن مجموعة الهيدروكسيل في Thr244 تشكل رابطة H مع مجموعة الكربوكسيل من GABA. من المتوقع أيضًا أن يكون لهذه البقايا اتصالات مختلفة مع GABA والتي قد تساهم في الاستقرار أثناء عملية البوابة. دراسة هذه البقايا المحبة للماء عن طريق طفرات النقطة المنطقية والاختبار ضد GABA ، تمكنت بعض الروابط التمثيلية من تحديد الدور الأساسي لـ Thr244 في المطابقة المغلقة / المفتوحة وأثناء بوابة القناة.

      يُفترض أن الرابطة H المتوقعة بين مجموعة الهيدروكسيل لـ Thr244 والسلسلة الجانبية لـ GABA أثناء عملية البوابة تتطلب حركة الحلقة C إلى الأمام بالقرب من الناهض في خطوة التحضير التي تبدأ التنشيط. تنخفض فعالية GABA بشكل معتدل عند إدخال السيرين في الموقع. على الرغم من أن GABA قادرة على تنشيط مستقبلات & # x003c11 T244A و & # x003c11 T244C ، إلا أن زيادة تركيز RNA كانت مطلوبة للتعبير عن هذه المستقبلات الطافرة. يشير هذا إلى أن مستوى التعبير ربما يكون قد انخفض بشكل ملحوظ مع هذه المستقبلات الطافرة. أظهرت الناهضات الجزئية التي تمت دراستها انخفاضًا كبيرًا في فعاليتها وكفاءتها عند & # x003c11 GABAج مستقبلات متحولة T244S. كما تبين أن التأثيرات المضافة / المثبطة لهذه الناهضات الجزئية تنخفض بشكل معتدل في نفس المستقبلات الطافرة. ومع ذلك ، احتفظت ناهضات الأليفاتية الجزئية التي تم اختبارها بتأثيرها الناهض / المضاد بينما أصبحت المنبهات الجزئية الحلقية غير المتجانسة المختبرة غير نشطة عند هذه المستقبلات الطافرة ، مما أدى إلى استعداء GABA EC بشكل كامل50 استجابات. تشير هذه النتائج إلى أن الاختلافات الهيكلية للمنبهات الجزئية قد تؤدي إلى تكوين تفاعلات مختلفة تؤدي إلى كفاءات مختلفة على الرغم من السمات الهيكلية المتشابهة. لم تظهر المضادات التنافسية المدروسة تغييرات في الفاعلية عند مستقبلات متحولة T244S مقارنة بمستقبلات النوع البري. قد يمنع الهيكل الأكبر لهذه المضادات حركة الحلقة C حيث يمكن للمتبقيين العطريين (Tyr241 و Tyr247) في الحلقة C أن يثبتا الترابط في موقع الربط دون تحريك الحلقة إلى الأمام مما قد يمنح النموذج الذي تنبأ بأن الخصوم لا يوجدون & # x02019t تشكيل الترابط H مع Thr244 (الشكل 15). يبدو أن اقتراح كل من خطوات التمهيدي والتقليب في المراحل المبكرة من تنشيط المستقبلات هي المحددات الرئيسية في فعالية ناهض.

      في حالة عدم وجود سلسلة جانبية من الهيدروكسيل في موضع Thr244 من خلال طفرة T244A ، أظهر # x003b2-alanine أعلى فعالية لجميع الناهضات والمنبهات الجزئية التي تم اختبارها في & # x003c11 GABAج مستقبلات متحولة T244A ، بما في ذلك GABA. توقعت دراسات نموذج التنادد أن & # x003b2-alanine تشكل المزيد من الاتصالات مع بقايا الألانين في الموضع 244 من GABA. في & # x003c11 غاباج أظهرت مستقبلات T244A ، & # x003b2-alanine استجابات منخفضة عندما تم تطبيق GABA أو TPMPA معها. تشير هذه النتائج إلى أن TPMPA ملزم في موقع الربط التقويمي لهذه المستقبلات الطافرة ، ولكن لوحظ انخفاض كبير في فعاليتها.

      أثار GABA استجابات صغيرة جدًا فقط بينما أظهرت MTSEA مع سلسلة جانبية ثيوسلفونات فعالية أكبر من GABA في & # x003c11 GABAج مستقبلات متحولة T244C. تتوقع دراسات الإرساء أن MTSEA لا تشكل تفاعلات S-S مع السيستين في الموضع 244 ، أو مع البقايا الأخرى ، مما يشير إلى أن MTSEA لا يشكل رابطة تساهمية. MTSEA الذي يُظهر تنشيطًا ضعيفًا وتأثيرات مضافة / تثبيط في & # x003c11 GABAج مستقبلات WT ، لا يزال لديها نفس حجم التنشيط في مستقبلات متحولة & # x003c11 T244C. ومع ذلك ، انخفضت الاستجابات لـ GABA بشكل كبير ، ويبدو أن GABA غير قادر على تثبيت التشكل المفتوح كما هو الحال في مستقبلات النوع البري & # x003c11.

      باختصار ، تعد Thr244 بقايا مهمة لتنشيط القناة لأنها تشكل رابطة H مع ناهضات ، وتبدأ التغييرات المطابقة المطلوبة لتهيئة المستقبل وتثبيت التشكل المفتوح. إن الحركة الأمامية للحلقة C لتشكيل غطاء يشبه الدرع فوق الناهض هي الخطوة الأولية الأساسية لبوابة القناة.


      الديناميكا الدوائية

      الرسوم البيانية المتدرجة للاستجابة والجرعة وربط الجرعة. (في مستحضرات الأنسجة المعزولة ، يستخدم التركيز عادة كمقياس للجرعة). أ. العلاقة بين جرعة الدواء أو تركيزه (الإحداثي) وتأثير الدواء (التنسيق). عندما يكون محور الجرعة خطيًا ، يتم الحصول على منحنى قطعي بشكل شائع. ب- نفس البيانات ، محور الجرعة اللوغاريتمية. يُرمز إلى الجرعة أو التركيز الذي يكون فيه التأثير نصف الحد الأقصى إلى EC50 ، في حين أن التأثير الأقصى هو Emax. ج. إذا تم رسم النسبة المئوية للمستقبلات التي تربط الدواء مقابل تركيز الدواء ، يتم الحصول على منحنى مماثل ، والتركيز الذي ترتبط عنده 50٪ من المستقبلات يرمز إلى Kd ، ويطلق على الحد الأقصى لعدد المستقبلات المرتبطة بـ Bmax.

      علاقة ملزمة متدرجة الجرعة وألفة ملزمة أمبير

      من الممكن قياس النسبة المئوية للمستقبلات المرتبطة بالدواء ، ومن خلال رسم هذه النسبة المئوية مقابل سجل تركيز الدواء ، يتم الحصول على رسم بياني مشابه لمنحنى الاستجابة للجرعة (الشكل 2-1C). يُشار إلى تركيز الدواء المطلوب لربط 50 ٪ من مواقع المستقبلات على أنه Kd وهو مقياس مفيد لتقارب جزيء الدواء لموقع الارتباط الخاص به على جزيء المستقبل. كلما كان Kd أصغر ، كلما زادت ألفة الدواء لمستقبله. إذا كان عدد مواقع الارتباط على كل جزيء مستقبل معروفًا ، فمن الممكن تحديد العدد الإجمالي للمستقبلات في النظام من Bmax.

      علاقات الاستجابة الكمية والجرعة

      عندما يتم تحديد الحد الأدنى للجرعة المطلوبة لإنتاج استجابة محددة في كل فرد من السكان ، يتم تحديد العلاقة الكمية بين الجرعة والاستجابة (الشكل 2-2). على سبيل المثال ، يمكن دراسة دواء لخفض ضغط الدم عن طريق قياس الجرعة المطلوبة لخفض متوسط ​​الضغط الشرياني بمقدار 20 ملم زئبق في 100 مريض بارتفاع ضغط الدم. عندما يتم رسمها كنسبة مئوية من السكان الذين يظهرون هذه الاستجابة في كل جرعة مقابل سجل الجرعة المعطاة ، يتم الحصول على منحنى الاستجابة للجرعة الكمي التراكمي ، عادة في الشكل السيني. يتم اشتقاق الجرعات الفعالة المتوسطة (ED50) ، والسمية المتوسطة (TD 50) ، والجرعات القاتلة المتوسطة (في الحيوانات) (LD50) من التجارب التي تم إجراؤها بهذه الطريقة. نظرًا لأن حجم التأثير المحدد يتم تحديده بشكل تعسفي ، فإن ED50 الذي تحدده قياسات الاستجابة للجرعة الكمية ليس له علاقة مباشرة بـ ED50 المحدد من منحنيات الاستجابة للجرعة المتدرجة. على عكس التحديد المتدرج للجرعة والاستجابة ، لم يتم إجراء أي محاولة لتحديد التأثير الأقصى للدواء. توفر بيانات الاستجابة الكمية للجرعة معلومات حول التباين في الحساسية للدواء في مجموعة سكانية معينة ، وإذا كان التباين صغيرًا ، يكون المنحنى حادًا.

      مخططات الاستجابة الكمية للجرعة من دراسة الآثار العلاجية والقاتلة لعقار جديد في الفئران. تشير الصناديق المظللة (والمنحنيات المصاحبة لها على شكل جرس) إلى التوزيع المتكرر لجرعات الدواء المطلوبة لإحداث تأثير محدد ، أي النسبة المئوية للحيوانات التي تتطلب جرعة معينة لإظهار التأثير. تشير المربعات المفتوحة (والمنحنيات السينية المقابلة) إلى التوزيع التكراري التراكمي للاستجابات ، والتي يتم توزيعها لوغاريتميًا بشكل طبيعي.

      (تم التعديل والاستنساخ ، بإذن ، من Katzung BG ، محرر: Basic & amp Clinical Pharmacology، 11th ed. McGraw-Hill، 2009: Fig.2-2.)

      الفعالية و ampmdashoften تسمى الفعالية القصوى و ampmdashis أكبر تأثير (Emax) يمكن أن ينتج عن ناهض إذا تم أخذ الجرعة إلى مستويات عالية جدًا. يتم تحديد الفعالية بشكل أساسي من خلال طبيعة الدواء والمستقبل ونظام المستجيب المرتبط به. يمكن قياسه بمنحنى استجابة متدرج للجرعة (الشكل 2-1) ولكن ليس بمنحنى الاستجابة للجرعة الكمي. بحكم التعريف ، فإن الناهضات الجزئية لها فعالية قصوى أقل من الناهضات الكاملة (انظر المناقشة اللاحقة).

      تشير الفاعلية إلى كمية الدواء اللازمة لإنتاج تأثير معين. في قياسات الاستجابة للجرعة المتدرجة ، يكون التأثير المختار عادةً هو 50٪ من التأثير الأقصى والجرعة التي تسبب هذا التأثير تسمى EC50 (الشكل 2-1A و B). يتم تحديد الفاعلية بشكل أساسي من خلال ألفة مستقبلات الدواء وعدد المستقبلات المتاحة. في القياسات الكمية للجرعة والاستجابة ، فإن ED50 و TD 50 و LD50 هي أيضًا متغيرات فاعلية (متوسط ​​الجرعات الفعالة والسامة والقاتلة ، على التوالي ، في 50 ٪ من السكان المدروسين). وبالتالي ، يمكن تحديد الفاعلية من المنحنيات المتدرجة أو الكمية للاستجابة للجرعة (على سبيل المثال ، الأشكال 2-1 و2-2) ، لكن الأرقام التي تم الحصول عليها ليست متطابقة.

      يقال إن المستقبلات الاحتياطية موجودة إذا تم الحصول على أقصى استجابة دوائية (إيماكس) في أقل من الحد الأقصى من شغل المستقبلات (Bmax). من الناحية العملية ، يتم التحديد عادةً بمقارنة التركيز لـ 50٪ من التأثير الأقصى (EC50) مع التركيز لـ 50٪ من الارتباط الأقصى (Kd). إذا كانت EC50 أقل من Kd ، يقال عن وجود مستقبلات احتياطية (الشكل 2-3). قد ينتج هذا عن آلية من آليتين. أولاً ، قد تكون مدة تنشيط المستجيب أكبر بكثير من مدة تفاعل الدواء مع المستقبل. ثانيًا ، قد يتجاوز العدد الفعلي للمستقبلات عدد جزيئات المستجيب المتاحة. يزيد وجود المستقبلات الاحتياطية من الحساسية للناهض لأن احتمالية تفاعل مستقبلات الدواء تزداد بما يتناسب مع عدد المستقبلات المتاحة. (على النقيض من ذلك ، لا يحتوي النظام الموضح في الشكل 2-1 ، اللوحات B و C ، على مستقبلات احتياطية ، لأن EC50 و Kd متساويان.)

      في نظام به مستقبلات احتياطية ، يكون EC50 أقل من Kd ، مما يشير إلى أنه لتحقيق 50٪ من التأثير الأقصى ، يجب تنشيط أقل من 50٪ من المستقبلات. تمت مناقشة تفسيرات هذه الظاهرة في النص.

      ناهضات ، ناهضات جزئية ، ومنبهات معكوسة

      تعتبر المفاهيم الحديثة لتفاعلات مستقبلات الدواء أن المستقبل له على الأقل حالتان و ampmdashactive وغير نشط. في حالة عدم وجود ligand ، قد يكون المستقبل نشطًا تمامًا أو غير نشط تمامًا بدلاً من ذلك ، فقد توجد حالة توازن مع بعض المستقبلات في الحالة المنشطة ومعظمها في الحالة غير النشطة (Ra + Ri الشكل 2-4). تُظهر العديد من أنظمة المستقبلات بعض النشاط في غياب الترابط ، مما يشير إلى أن بعض المستقبلات في حالة التنشيط. يسمى النشاط في حالة عدم وجود يجند النشاط التأسيسي. ناهض كامل هو دواء قادر على التنشيط الكامل لنظام المستجيب عندما يرتبط بالمستقبل. في النظام النموذجي الموضح في الشكل 2-4 ، يكون للناهض الكامل تقارب كبير لتشكيل المستقبل النشط ، وتؤدي التركيزات العالية بما فيه الكفاية إلى تحقيق جميع المستقبلات للحالة النشطة (Ra-Da). ينتج الناهض الجزئي أقل من التأثير الكامل ، حتى عندما يكون قد تشبع المستقبلات (Ra-Dpa + Ri-Dpa) ، على الأرجح عن طريق الدمج مع كل من مطابقة المستقبلات ، ولكن يفضل الحالة النشطة. في وجود ناهض كامل ، يعمل ناهض جزئي كمثبط. في هذا النموذج ، ترتبط الخصوم المحايدة بألفة متساوية مع حالات Ri و Ra ، مما يمنع الارتباط بواسطة ناهض ويمنع أي انحراف عن مستوى النشاط التأسيسي. على النقيض من ذلك ، فإن المنبهات العكسية لها تقارب أعلى بكثير لحالة Ri غير النشطة مقارنةً بـ Ra وتستبعد أي نشاط تكويني.

      العلوي: نموذج واحد لتفاعلات مستقبلات الدواء. المستقبل قادر على افتراض 2 مطابقة ، Ri و Ra. في حالة Ri ، يكون غير نشط ولا ينتج عنه أي تأثير ، حتى عندما يقترن بجزيء دواء (D). في حالة Ra ، يتم تنشيط مؤثراته ويتم تسجيل التأثير ، حتى في حالة عدم وجود ligand. في حالة عدم وجود دواء ، يحدد التوازن بين Ri و Ra درجة النشاط التأسيسي. أقل: يمتلك عقار ناهض كامل (Da) تقاربًا أعلى بكثير مع Ra مقارنةً بتكوين مستقبل Ri ، ويتم إنتاج التأثير الأقصى عند تركيز دواء عالٍ بدرجة كافية. يمتلك عقار ناهض جزئي (Dpa) تقاربًا أكبر إلى حد ما مع Ra مقارنةً بتكوين Ri وينتج تأثيرًا أقل ، حتى عند تركيزات التشبع. يرتبط المضاد المحايد (Dant) بألفة متساوية لكل من مطابقة المستقبلات ويمنع ارتباط الناهض. ناهض معكوس (Di) يرتبط بشدة أكثر بتشكيل مستقبل Ri ، ويمنع التحول إلى حالة Ra ، ويقلل من النشاط التأسيسي.

      (تم التعديل والاستنساخ ، بإذن ، من Katzung BG ، محرر: Basic & amp Clinical Pharmacology، 11th ed. McGraw-Hill، 2009: Fig.1-4.)


      نتائج ومناقشة

      نمذجة التناسق ودراسات الالتحام GABA مع threonine 244

      يتنبأ نموذجنا الذي تم إنشاؤه بوجود رابطة هيدروجينية بين مجموعة الهيدروكسيل لـ Thr244 في الحلقة C ومجموعة الكربوكسيل من GABA (الشكل 2 أ). يساعد هذا التفاعل في الربط الناهض وقد يسهل عملية التبويض بسبب حركة الحلقة C إلى الداخل ، مما يؤدي إلى التشكل المفتوح وتنشيط المستقبل [27].

      A. GABA والمخلفات المحيطة في موقع الربط التقويمي لـ ρ1 GABAج نموذج التنادد. منحنيات استجابة التركيز لـ GABA عند 1 GABAج مستقبلات WT و ρ1 T244S و ρ1 T244A و ρ1 T244C (البيانات = متوسط ​​± SEM ، n = 5). ملاحظة: أثارت GABA فعالية دون الحد الأقصى مقارنة بـ β-alanine و MTSEA عند مستقبلات متحولة 1 T244A و ρ1 T244C ، على التوالي.

      تحور ثريونين 244 إلى سيرين وألانين وسيستين

      تم اختبار GABA لأول مرة على جميع المستقبلات الطافرة من أجل تحديد وظيفة هذه المستقبلات. ρ1 غاباج أظهرت مستقبلات متحولة T244S انخفاضًا بمقدار 35 ضعفًا في فاعلية GABA مع EC50 35 ميكرومتر كما ورد سابقًا [21 ، 22]. ρ 1 غاباج T244A و ρ1 غاباج بدت المستقبلات الطافرة T244C في البداية غير وظيفية أو غير حساسة لـ GABA بتركيز 30 ملي مولار. ومع ذلك ، أدت زيادة تركيز الحمض النووي الريبي الطافرة المحقونة في البويضات من 50-100 نانوغرام / ميكرولتر إلى 300 نانوغرام / ميكرولتر إلى ظهور تعبيرات عن المستقبلات التي كانت ضعيفة الاستجابة لـ GABA بتركيزات عالية (الشكل 2 ب).

      Ρ 1 غاباج مستقبلات متحولة T244S

      يشير الانخفاض المعتدل في فاعلية GABA الذي يحدث عند مستقبلات متحولة ρ1 T244S إلى أهمية مجموعة ميثيل ثريونين في تقييد موضع مجموعة الهيدروكسيل التي تنبأ بها النمذجة لتشكيل رابطة هيدروجينية مع مجموعة الكربوكسيل من GABA [27]. عندما تم اختبار الناهضات الجزئية إيميدازول-4-حمض الأسيتيك والموسيمول في مستقبلات متحولة ρ1 T244S ، تم القضاء على آثارها الناهضة عن طريق الطفرة وعملت فقط كمضادات تنافسية. على الرغم من أن أفعال المنبهات والجزئية قد تأثرت بطفرة T244S ، إلا أن نشاط المضادات التنافسية في هذه الدراسة ظل دون تغيير عند هذه المستقبلات الطافرة مقارنة بمستقبلات ρ1 WT [22].

      التأثيرات الناهضة لـ TACA و CACA عند مستقبلات ρ1 T244S.

      ال عبر و رابطة الدول المستقلة أيزومرات حمض كروتونيك ، TACA و CACA على التوالي (الشكل 1) ، مقيدة بالتوافق مع نظائر GABA غير المشبعة. TACA ناهض قوي (EC50 = 0.6 ميكرومتر) عند ρ1 مستقبلات WT (الشكل 3 أ) ، أظهر انخفاضًا بمقدار 25 ضعفًا في النشاط عند ρ1 T244S مستقبلات متحولة (EC50 = 14 ميكرومتر ، الشكل 3 ب). ومع ذلك ، فإن الناهض الجزئي CACA (EC50 = 95 ميكرومتر) عند مستقبلات ρ1 WT (الشكل 3 أ) أصبحت غير نشطة تقريبًا عند مستقبلات متحولة ρ1 T244S ، مما أدى إلى الحد الأدنى من الاستجابة عند 300 ميكرومتر (الشكل 3 ب).

      منحنيات استجابة التركيز لـ GABA ونظائرها غير المشبعة ، TACA و CACA عند (A) ρ1 WT و (B) ρ1 T244S مستقبلات ، (البيانات = يعني ± SEM ، ن = 5). (C) آثار عينة من الاستجابات القصوى لـ GABA و TACA عند مستقبلات ρ1 WT و ρ1 T244S.

      تم أيضًا تغيير فعالية الروابط غير المشبعة نتيجة طفرة ρ1 T244S. من المثير للاهتمام أن TACA ، الذي يظهر فعالية 95 ٪ بالنسبة إلى استجابة GABA القصوى عند مستقبلات ρ1 WT ، أكثر فاعلية قليلاً (110 ٪) من GABA عند مستقبلات ρ1 T244S (P ˂ 0.05) (الشكل 3C). CACA الذي يظهر فعالية بنسبة 60 ٪ فقط بالنسبة للاستجابة القصوى لـ GABA عند مستقبلات النوع البري -1 له فعالية 2 ٪ فقط عند مستقبلات ρ1 T244S (الشكل 4 أ).

      (أ) GABA و TACA و CACA راسية في موقع الربط التقويمي لـ ρ1 GABAج نموذج تجانس قائم على GluCl في التشكل المفتوح. (ب) يطرح GABA و TACA في مطابقاتهما الملزمة التي توضح المسافات بين القطبين. (ج) جهات اتصال مختلفة من السلسلة الجانبية لـ GABA مع السلسلة الجانبية للسيرين في موقع Thr244. (د) جهات اتصال مختلفة من السلسلة الجانبية لـ TACA مع السلسلة الجانبية للسيرين في موقع Thr244. يحتوي rotamer من سيرين الموضح في D و E على Chi1 و Chi2 متشابهين (أيالزاويتان الأولى والثانية من السلسلة الجانبية) قيمًا للتشكيل المتوقع لـ Thr244 في هذا الموقع (أنا.ه. تشي = 91 و تشي 2 = –179).

      TACA لها مسافة أطول قليلاً بين أقطاب الكربوكسيل والأمونيوم من GABA (الشكل 4 ب) ، ويتنبأ نموذجنا بالاتجاه المرتبط بالكربوكسيلات الذي يتبنى اتجاهًا مختلفًا قليلاً عن اتجاه GABA و CACA (الشكل 4 أ و 4 ب) ومن المتوقع أن تكون أكثر قدرة على تكوين جهات اتصال مع السلسلة الجانبية لبقايا السيرين في الموضع 244 (الشكل 4C و 4 D). قد يؤدي هذا التفاعل إلى زيادة استقرار التشكل المفتوح ويكون مسؤولاً عن الفعالية العالية لـ TACA في هذه المستقبلات الطافرة.

      تأثيرات CACA المطبقة بالاشتراك مع GABA EC50 في مستقبلات ρ1 T244S.

      التطبيق المشترك لـ CACA له تأثير إضافي على GABA EC50 استجابات في مستقبلات ρ1 WT ، تصل إلى 150 ٪ من GABA EC50 فعالية عند 100 ميكرومتر CACA (الشكل 5 أ و 5 ب). التأثير الإضافي لـ CACA مشابه في الحجم لتأثير CACA المطبق بمفرده عند مستقبلات ρ1 WT. هناك خمسة مواقع ربط مكافئة وقد تم التنبؤ بأن ثلاثة جزيئات على الأقل من GABA مطلوبة للارتباط في كل GABA الخماسيج مستقبل من أجل الحصول على استجابة. تشير هذه النتائج إلى أن CACA ملزم في المواقع الشاغرة على المستقبلات التي تنشط المستقبلات بحيث يتم فتح المزيد من المستقبلات الفردية ، مما يؤدي إلى استجابة قصوى.

      (أ) منحنى استجابة التركيز للتطبيق المشترك لتركيزات متزايدة من CACA في وجود GABA EC50 عند مستقبلات ρ1 WT و ρ1 T244S ، (البيانات = متوسط ​​± SEM ، ن = 5). آثار عينة من CACA مطبقة بالاشتراك مع GABA EC50 في ρ1GABAج (ب) مستقبلات WT و (C) ρ1 T244S.

      ومن المثير للاهتمام ، على الرغم من حقيقة أن CACA المطبق بمفرده غير نشط تقريبًا عند مستقبلات ρ1 T244S (الشكل 5 ب) ، تم تطبيق CACA في وجود GABA EC50 يظهر تأثير إضافي على GABA EC50 الاستجابات عند هذه المستقبلات الطافرة ، فإن حجم 300 ميكرومتر من CACA المطبق بمفرده أقل من 2 ٪ من GABA Iالأعلى، لكن GABA EC50 يتم تحسين التأثير بنسبة تقريبية 20٪ عند 100 ميكرومتر CACA (الشكل 5). يشير هذا إلى أن الارتباط و / أو التنشيط بواسطة GABA يغير شكل مواقع الربط الشاغرة مما يسمح لـ CACA بتنشيط المستقبل بشكل أكثر فعالية عندما يتم تطبيق CACA بمفرده ، مما يؤدي إلى تأثير إضافي.

      تأثيرات ناهضة للجليسين ، بيتا ألانين وحمض 5-أمينوفاليريك.

      في مستقبلات ρ1 WT ، فإن نظائرها من GABA بأعداد متفاوتة من ذرات الكربون في العمود الفقري ، والجليسين ، وبيتا ألانين وحمض 5-أمينوفاليريك ، على التوالي (الشكل 1) هي ناهضات جزئية ضعيفة (الشكل 6 أ) [37 ، 38]. مقارنة بآثارها على مستقبلات WT ، انخفضت فاعلية وكفاءة هذه الناهضات الجزئية عند مستقبلات متحولة ρ1 T244S. أظهر كل من الجليسين وبيتا ألانين انخفاضًا كبيرًا في الفعالية ، بحد أقصى 8 ٪ و 5 ٪ بالنسبة إلى استجابة GABA القصوى عند 30 ملي مولار. أظهر المركب الأقل فاعلية عند مستقبلات ρ1 WT ، وهو حمض 5-aminovaleric انخفاضًا كبيرًا في الفاعلية ، مما أدى إلى تحويل المنحنى إلى اليمين ، ومع ذلك ، كان الرابط لا يزال قادرًا على تنشيط المستقبلات الطافرة بشكل ضعيف بتركيزات عالية جدًا (6000 ميكرومتر ، 3٪ فعالية نسبية للاستجابة القصوى لـ GABA عند 30 مم) (الشكل 6 ب).

      منحنيات استجابة التركيز لـ GABA و glycine و β-alanine و 5-aminovaleric acid عند مستقبلات ρ1 WT (A) و ρ1 T244S (B) ، (البيانات = متوسط ​​± SEM ، ن = 5).

      آثار الجلايسين وبيتا ألانين وحمض أمينوفاليريك 5 المطبقة بالاشتراك مع GABA EC50 في مستقبلات ρ1 T244S.

      يعرض الجلايسين الناهض الجزئي تأثيرًا إضافيًا على GABA EC50 الاستجابات عند مستقبلات ρ1 WT ، فعالية بنسبة 180٪ (نسبة إلى GABA EC50 تم ضبط الاستجابة على 100٪) ، وله تأثير مماثل عند ρ1 T244S مستقبلات متحولة ولكن بحجم أقل ، فعالية 145٪. في مستقبلات ρ1 T244S ، يتم تقليل هذا التأثير الإضافي بتركيزات أعلى من 1 مم (الشكل 7 أ). على الرغم من القدرة على تنشيط هذه المستقبلات بشكل مباشر بنسبة 25 ٪ (1 WT) و 2 ٪ (ρ1 T244S) بتركيزات ملي مول (الشكل 7 أ) ، فإن التأثيرات المضافة الهامة للجليسين في كل من مستقبلات ρ1 WT و T244S تشير إلى أن الجلايسين قادر على تلتصق في مواقع الربط الشاغرة وتكون قادرة على تنشيط هذه المستقبلات بشكل أكثر فعالية. لا تستطيع جزيئات الجلايسين التنافس بفعالية مع GABA في المواقع التي يرتبط فيها GABA بمستقبلات ρ1 WT. هذا على الأرجح لأن GABA لديه تقارب ارتباط أعلى بكثير عند مستقبلات ρ1 WT. ومع ذلك ، في مستقبلات متحولة ρ1 T244S ، من المحتمل أن يتم تقليل تقارب الارتباط لـ GABA ، وبالتالي عند تركيزات عالية جدًا من الجليسين ، قد تحدث بعض المنافسة بين الربيطين لنفس موقع الارتباط ، ولكن بدون إزاحة كبيرة لجزيئات GABA ، مما يؤدي إلى في عدد أقل من القنوات التي يتم تنشيطها ، وبالتالي يتضاءل التأثير الإضافي للجليسين عند 10 ملم (الشكل 7 أ).

      منحنيات استجابة التركيز لـ GABA EC50 في وجود (A) جلايسين ، (B) β-alanine و (C) 5-aminovaleric acid عند مستقبلات ρ1 WT و ρ1 T244S ، (البيانات = يعني ± SEM ، ن = 5).

      بتركيزات تصل إلى 100 ميكرومتر β- ألانين في وجود GABA EC50 له تأثيرات مضافة ضعيفة عند مستقبلات ρ1 WT (125٪) ومستقبلات متحولة ρ1 T244S (115٪) ، على التوالي. بتركيزات تزيد عن 100 ميكرومتر β- ألانين ، يعمل كمضاد في كل من مستقبلات 1 WT و ρ1 T244S (يثبط-ألانين 60٪ من GABA EC50 في كلا المستقبلين). ومع ذلك فإن IC50 يتم زيادة β-alanine 8 أضعاف عند مستقبلات ρ1 T244S مقارنة بـ ρ1 WT (120 ميكرومتر و 1 ملي مولار من ألانين β- يعادي GABA EC50 الاستجابات عند مستقبلات ρ1 WT و ρ1 T244S ، على التوالي) (الشكل 7 ب).

      بحضور GABA EC50, يعمل حمض 5-أمينوفاليريك كمضاد في كل من مستقبلات ρ1 WT و ρ1 T244S بتركيزات أكبر من 1 ميكرومتر (الشكل 7 ج). ومع ذلك ، فإن فاعلية حمض 5-aminovaleric تزداد ضعفين ρ1 T244S مستقبلات مع IC50 = 17 ميكرومتر مقارنة بـ 37 ميكرومتر عند مستقبلات ρ1 WT (الشكل 7C). يسمح طول السلسلة الممتد لحمض 5-aminovaleric مقارنة بـ GABA لحمض 5-aminovaleric لتشكيل التفاعلات المطلوبة مع المستقبلات في apo الحالة والبروتين غير مطلوب في الغالب للخضوع لتغيير توافقي ينشط إما مستقبلات ρ1 WT أو ρ1 T244S (الشكل 8). قد تؤدي مجموعة الميثيلين الإضافية المكونة من حمض 5-أمينوفاليريك إلى مزيد من الاتصالات الكارهة للماء في موقع الربط الذي يزيد من استقرار apo الدولة على التشكل المفتوح. من المحتمل أن تكون الزيادة في فعالية المضاد لحمض 5-أمينوفاليريك عند مستقبلات ρ1 T244S بسبب طول السلسلة الممتد مما يؤدي إلى زيادة المرونة مما يسمح لمجموعة الكربوكسيل بتكوين تفاعلات مع السلسلة الجانبية للسيرين في الموضع 244 بشكل أكثر فعالية من GABA.

      GABA (أبيض) وحمض 5-aminovaleric (أحمر) يرسو في موقع ربط orthosteric لـ ρ1 GABAج نموذج تجانس قائم على GluCl في apo حالة.

      Isoguvacine و ρ1 T244S مستقبلات متحولة

      تأثير ناهض من isoguvacine.

      تم اختبار isoguvacine التماثلية GABA الحلقية غير المتجانسة (الشكل 1) عند مستقبلات ρ1 WT و ρ1 T244S. هذا الترابط هو ناهض جزئي ضعيف ، ينشط مستقبلات WT مع EC50 = 200 ميكرومتر [39] وفعالية 45٪ بالنسبة إلى استجابة GABA القصوى. ومع ذلك ، في مستقبلات متحولة ρ1 T244S ، يتم تقليل فاعلية وفعالية isoguvacine بشكل كبير مع استجابة بنسبة 30 ٪ فقط عند تركيز 600 ميكرومتر (الشكل 9 أ).

      (أ) منحنيات استجابة التركيز لـ GABA و isoguvacine عند مستقبلات ρ1 WT ، (البيانات = متوسط ​​± SEM ، ن = 5). (ب) منحنيات استجابة التركيز للتطبيق المشترك للإيزوجوفاسين مع GABA EC50 في ρ1 غاباج مستقبلات WT و ρ1 T244S ، (البيانات = متوسط ​​± SEM ، ن = 5). آثار استجابة عينة من isoguvacine عند تطبيقها بالاشتراك مع GABA EC50 عند (C) ρ1 مستقبلات GABAC WT و (D) عند مستقبلات ρ1 T244S.

      دراسات الالتحام لهذا يجند في ρ1 GABAج يتنبأ نموذج التماثل H- الترابط لمجموعة الهيدروكسيل من Thr244 مع مجموعة الكربوكسيل من isoguvacine (الشكل 10 أ). هناك أيضًا تفاعلات كارهة للماء بين السلاسل الجانبية لـ Thr244 و isoguvacine (الشكل 10 ب). قد تؤدي هذه التفاعلات إلى زيادة استقرار المستقبل في التشكل المفتوح. يشير الانخفاض الكبير في فعالية وفعالية isoguvacine عند إدخال السيرين في موقع Thr244 إلى أهمية الرابطة H والتفاعلات الأخرى بين السلسلة الجانبية من isoguvacine و Thr244 في تثبيت المستقبل في التشكل المفتوح.

      (أ) روابط H و (ب) التفاعلات الكارهة للماء المتوقع تشكيلها بواسطة isoguvacine و ρ1 GABAج مستقبل.

      التأثيرات المضادة للإيزوجوفاسين.

      في مستقبلات ρ1 WT ، يكون للإيزوجوفاسين تأثير مضاف معتدل على GABA EC50 استجابة تصل إلى 135٪ (الشكل 9 ب و 9 ج). ومع ذلك ، في ρ1 T244S تعمل مستقبلات isoguvacine المتحولة كمضاد كامل (IC50 = 25.3 ميكرومتر) ضد GABA EC50 (الشكل 9 ب و 9 د).

      تشير هذه النتائج إلى أن isoguvacine وحده يرتبط بمستقبلات متحولة ρ1 T244S ولكنه لا يثبت التشكل المفتوح. بحضور GABA EC50 يتم تغيير تأثير isoguvacine من تأثير إضافي عند مستقبلات ρ1 WT إلى مستقبلات متحولة ρ1 T244S المضاد. تسمح إزالة مجموعة الميثيل من السلسلة الجانبية للسيرين بتبني اتجاه يسمح بتكوين رابطة H مع isoguvacine الذي لا يتطلب حركة الحلقة C في التشكل المفتوح.

      دراسة نشاط ناهضات جزئية مختلفة هيكلياً عند ρ1 GABAج تشير مستقبلات متحولة T244S إلى أن التأثير الكلي للطفرة يتم تحديده من خلال بنية الترابط. انخفضت فعالية وفعالية ناهضات الأليفات الجزئية (الجلايسين ، ألانين وحمض 5-أمينوفاليريك) بشكل كبير ، لكنها كانت لا تزال قادرة على تنشيط مستقبلات ρ1 T244S بشكل ضعيف بتركيزات عالية جدًا. ومع ذلك ، فإن الناهض الجزئي الحلقية غير المتجانسة ، isoguvacine ، الذي يفتقر إلى المرونة التوافقية ، تم تحويله إلى مضاد كامل.

      تأثير طفرة T244S على نشاط مضادات TPMPA و THIP

      مقارنة بتأثير GABAج المضادات ، TPMPA و THIP (الشكل 1) على مستقبلات WT ، لا تؤثر طفرة T244S على فاعلية هذه الروابط [40 ، 41]. دراسات النمذجة والالتحام مع GABAج نموذج قائم على GluCl في ملف apo تتنبأ الحالة بأن الحلقة C ممنوعة بشكل صارم من التحرك إلى الداخل وتشكيل درع فوق الترابط كخطوة أساسية في التشكل المفتوح. قد يثبط الهيكل الأكبر للمضادات حركة الحلقة C الأقرب إلى الترابط مما يمنع الخطوة الأولية اللازمة لتنشيط القناة [27].

      Ρ 1 غاباج مستقبلات متحولة T244A

      استبدال الألانين للثريونين في الموضع 244 يزيل مجموعة الهيدروكسيل. في مستقبلات ρ1 T244A ، تم تقليل فاعلية وفعالية GABA (الشكل 11 أ و 11 ب) بشكل كبير (ρ1 WT = 1 ميكرومتر ، ρ1 T244A = 4960 ميكرومتر). تم العثور على منبهات ρ1 WT و TACA و muscimol والمنبهات الجزئية والجليسين وحمض 5-aminovaleric أقل فعالية من GABA. ومع ذلك ، وجد أن بيتا ألانين يحتوي على كربون واحد أقل من GABA ، يكون أكثر فاعلية (EC50 = 1496 ميكرومتر ، الشكل 11 أ) وأكثر فعالية مرتين تقريبًا من GABA بتركيز 30 ملي مولار على ρ1 T244A مستقبلات متحولة (الشكل 11 ب). مقارنة بتأثيراته على مستقبلات ρ1 WT (الشكل 6) ، تم تقليل فاعلية بيتا ألانين مرتين فقط عند مستقبلات T244A.

      منحنيات استجابة التركيز لـ β-alanine و GABA عند ρ1 T244A مستقبلات متحولة ، (البيانات = متوسط ​​± SEM ، ن = 15). (ب) آثار استجابة عينة من β- ألانين و GABA في ρ1 T244A مستقبلات متحولة. (C) آثار استجابة العينة لـ β-alanine و GABA و TPMPA عند مستقبلات ρ1 T244A.

      يشير نموذجنا إلى أن β-alanine لا يشكل جسرًا ملحًا بين محطة الأمونيوم و Glu196 بنفس طريقة GABA. يمكن تثبيت مجموعة الأمونيوم لـ β- ألانين بواسطة الصندوق العطري في موقع الربط (الشكل 12 أ). قد يفسر هذا أيضًا تنقل β-alanine في موقع الربط مقارنةً بـ GABA ، مما يسمح له بالاقتراب قليلاً من المزيد من الاتصالات الكارهة للماء بين ألانين مستقبلات T244A ، مما يؤدي إلى استقرار التشكل المفتوح (الشكل 12 ب).

      (أ) دراسات الالتحام GABA وبيتا ألانين في موقع الربط التقويمي لـ GABAج نموذج تجانس قائم على GluCl في التشكل المفتوح. (يسار) روابط هيدروجينية بين السلاسل الجانبية لـ GABA و-alanine مع سلاسل جانبية من بقايا Thr244 و Glu196. (يمين) تفاعلات مختلفة كارهة للماء بين السلاسل الجانبية لـ GABA و-alanine مع سلاسل جانبية من Thr244 و Glu196. (ب) دراسات الالتحام GABA وبيتا ألانين في موقع الربط التقويمي لـ GABAج نموذج تجانس قائم على GluCl في التشكل المفتوح. (يسار) التفاعلات الكارهة للماء بين السلسلة الجانبية GABA وبقايا الألانين في موقع Thr244. (يمين) التفاعلات الكارهة للماء بين السلسلة الجانبية-ألانين وبقايا الألانين في موقع Thr244. (ج) دراسات الالتحام TPMPA في موقع الربط التقويمي لـ GABAج نموذج تجانس قائم على GluCl في apo التشكل. (يسار) التفاعلات الكارهة للماء بين السلسلة الجانبية لـ TPMPA والسلسلة الجانبية لـ Thr244. التفاعلات الكارهة للماء (الوسطى) بين السلسلة الجانبية لـ TPMPA والسلسلة الجانبية لبقايا السيرين في موقع Thr244. (يمين) التفاعلات الكارهة للماء بين السلسلة الجانبية لـ TPMPA والسلسلة الجانبية لبقايا الألانين في موقع Thr244.

      تم تحور ثريونين 244 أيضًا إلى ألانين في السيليكو في ρ1 غاباج نموذج التماثل الذي تم استخدامه لدراسات الالتحام مع GABA و β-alanine. تتنبأ دراسات الالتحام بمزيد من التفاعلات الكارهة للماء لمجموعة الكربوكسيل من بيتا ألانين مع بقايا الألانين في الموضع 244 ، مقارنة بمجموعة الكربوكسيل في GABA. قد توفر هذه التفاعلات الكارهة للماء ثباتًا إضافيًا لـ β-alanine في موقع الربط أثناء البوابة ، مما قد يعزز أيضًا فعالية وفعالية الترابط (الشكل 12 ب). قد يؤدي العدد الأكبر من تفاعلات β- ألانين مع بقايا الألانين في الموضع 244 إلى استقرار الحلقة C بالقرب من الترابط ، وهو أمر ضروري لتنشيط القناة.

      تم التحقيق أيضًا في التأثيرات المضادة لـ GABA و TPMPA ضد استجابة بيتا ألانين (30 ملي مولار) عند مستقبلات 1 T244A. عندما تم تطبيق 30 ملي مولار من GABA مع 30 ملي مولار من ألانين ، فإن GABA يثبط بشكل معتدل الاستجابات التي أثارها β-alanine (الشكل 11C). تشير هذه النتائج إلى أن GABA يعمل بمثابة ناهض جزئي في ρ1 T244A مستقبلات متحولة. من ناحية أخرى ، لا يكون للمضاد TPMPA أي تأثير عند تطبيقه بمفرده ، ولكنه يعاكس استجابات بيتا ألانين بشكل ضعيف عند 1 ملي مولار (الشكل 11 ج). ومع ذلك ، فإن فاعلية TPMPA انخفضت بشكل ملحوظ في المستقبلات الطافرة مقارنة بمستقبلات ρ1 WT حيث تحتوي على IC.50 = 2.3 ميكرومتر مقابل GABA ، مما يشير إلى أن الهيدروكسيل الحر لسيرين أو ثريونين في الموضع 244 مهم للربط وبالتالي فاعلية مضاد TPMPA. تتنبأ دراسات النمذجة التي أجريناها بأن TPMPA يشكل أكبر عدد من جهات الاتصال الكارهة للماء مع Thr244 ، بينما يشكل عددًا أقل من جهات الاتصال الكارهة للماء مع سيرين في الموضع 244 ، وأقل عدد من جهات الاتصال الكارهة للماء بين TPMPA والألانين عند مستقبلات T244A (الشكل 12C) ).

      Ρ 1 غاباج مستقبلات متحولة T244C

      اقترحت التجارب الأولية أن مستقبلات T244C الطافرة لم تعبر عن ذلك ، ولكن حقن خمسة أضعاف تركيز الحمض النووي الريبي المحقون عادة أدى إلى استجابة ضعيفة جدًا لـ GABA (30 ملي مولار). ومن المثير للاهتمام ، أن نظير GABA التفاعلي 2-aminoethylmethane thiosulfonate (MTSEA) وجد أنه ينتج استجابات عكوسة عند مستقبلات متحولة ρ1 T244C ذات فعالية وفعالية أكبر من GABA (الشكل 13 أ و 13 ب).

      (أ) منحنيات استجابة التركيز لـ MTSEA و GABA عند ρ1 T244C مستقبلات متحولة ، (البيانات = متوسط ​​± SEM ، ن = 15). (ب) آثار استجابة عينة من MTSEA و GABA في ρ1 مستقبلات WT. (ج) آثار استجابة عينة من MTSEA في ρ1 T244C مستقبلات.

      ينشط MTSEA مستقبلات ρ1 WT بكفاءة وفعالية ضعيفة للغاية (الشكل 13C). عندما يتم تطبيق هذا الترابط مع GABA EC50، بتركيزات أقل من 100 ميكرومتر ، يكون لها تأثيرات مضافة ضعيفة على GABA EC50 استجابة ، ولكن بتركيزات 100 ميكرومتر وما فوقها يعادي GABA EC بشكل ضعيف50 الردود (الشكل 13 ب).

      تتنبأ دراسات الإرساء لـ MTSEA في موقع الربط العمودي لنموذج التماثل ρ1 أن رابطة H لا تتشكل بين أكسجين السلفونيل في MTSEA ومجموعة الهيدروكسيل من Thr244 ، على الرغم من حدوث عدد من التفاعلات بين السلاسل الجانبية لـ MTSEA و Thr244 (الشكل 14 أ). علاوة على ذلك ، استبدال ثريونين بالسيستين في الموضع 244 في السيليكو توقع أن السيستين الذي تم إدخاله موجود في الغالب على شكل دوار حيث يتم توجيه الثيول بعيدًا عن موقع الربط (Chi1 = -64 °) مما قد يفسر سبب عدم تكوين رابطة S-S غير القابلة للعكس بين MTSEA و cysteine ​​(الشكل 14 ب). ومع ذلك ، لا يزال MTSEA قادرًا على تنشيط مستقبلات ρ1 T244C بحجم مماثل لمستقبلات ρ1 WT ، على الرغم من انخفاض حساسية GABA عند مستقبلات متحولة ρ1 T244C بشكل كبير.

      دراسات لرسو السفن من MSTEA و GABA (أ) في WT ρ1 GABAج نموذج تجانس قائم على GluCl في التشكل المفتوح. (ب) دراسات الإرساء لـ GABA (أبيض) و MTSEA (أصفر) مع نموذج تجانس 1 T244C على أساس GluCl حيث يتم توجيه مجموعة thiol من Cys244 بعيدًا عن موقع الربط (Chi1 = -64 °).

      بالإضافة إلى ذلك ، نظرًا لمجموعة الميثيل الخاصة بميثان ثيوسلفونات الميثان ، يتم توقع MTSEA من خلال دراسات الالتحام لتشكيل تفاعلات أكثر بقليل مع بقايا السيستين في الموضع 244 من مجموعة الكربوكسيل في GABA. لذلك ، بمجرد إزالة هيدروكسيل الثريونين ، قد يمنح MTSEA ثباتًا أفضل لتشكيل القناة المفتوحة من خلال التفاعلات الكارهة للماء عند مستقبلات متحولة ρ1 T244C مقارنة بـ GABA (الشكل 14 ب).

      Threonine 244 وتفعيل القناة

      GABA في موقع الربط التقويمي لـ ρ1 GABAج تشكل رابطة H مع مجموعة الهيدروكسيل من Thr244 ، ويتطلب هذا التفاعل Loop C للتحرك نحو GABA. يعمل المضاد التنافسي بشكل أساسي على تثبيت الشكل المغلق الذي يحمل المستقبل في الشكل المغلق ويمنع التهيئة اللازمة لفتح القناة [42] ، وبالتالي يمنع GABA من الارتباط. تلك الروابط التي تثبط الاستجابات الناهضة ترتبط بإحكام في الموقع وتثبت المستقبل في الحالة غير النشطة. يمكن تحقيق ذلك في موقع الربط التقويمي لـ ρ1 GABAج مستقبلات من خلال مضادات تشكل اتصالات إضافية كارهة للماء مع بقايا عطرية تحيط بموقع الارتباط. بالإضافة إلى حجب الموقع الذي يمنع GABA أو ناهضات أخرى من ربط القناة وتنشيطها ، تعمل هذه التفاعلات على استقرار التشكل المغلق عن طريق تثبيط حركة الحلقة C.

      في حالة ρ1 GABAج القنوات الأيونية ، الرابطة الحلقية غير المتجانسة الأكبر حجمًا والمقيدة بالتوافق ، ترتبط TPMPA في الموقع وتشكل اتصالات كارهة للماء مع Tyr241 و Tyr247 الموجودة في الحلقة C والتي تمنع الحلقة من التحرك للأمام وبالتالي تؤدي إلى استقرار القناة في التشكل القريب (الشكل 15) .

      تتشكل تفاعلات متعددة كارهة للماء بين TPMPA ومخلفات الحلقة C Tyr241 و Tyr247.


      صناعة الأدوية: المبادئ الأساسية 1

      يشير إلى تأثير الدواء على جسم الإنسان ( ما يفعله الدواء بالجسم ).

      الخصائص الدوائية للدواء (على سبيل المثال ، آلية عمل الدواء , العلاقة بين التأثير والتركيز ، & hellip) تحديد مجموعة أو فئة الأدوية التي يُصنف الدواء فيها وتلعب الدور الرئيسي في تحديد ما إذا كانت هذه الفئة من الأدوية علاجًا فعالًا لمرض أو عرض معين.

      PD هو أساس العلاجات الدوائية .

      لرسم مخطط PD ، استخدم التركيز مقابل الاستجابة ، أو بعبارة أخرى ، الجرعة مقابل التأثير .

      يمكن اعتبار PD كعواقب أو أفعال ماذا يحدث عندما يرتبط الدواء بموقع المستقبل .

      حرفيا lsquo و حركة الدواء & [رسقوو] ، يشير إلى تصرفات جسم الإنسان على الدواء ( ما يفعله الجسم بالمخدر ).

      إنها دراسة الامتصاص والتوزيع والتخليص ( التمثيل الغذائي / الإخراج ) من عقار (أو ADME الخصائص من الدواء) فيما يتعلق بالوقت ، وإقامة علاقة بين تركيز الدواء والزمن.

      لرسم بي كيه ، استخدم التركيز مقابل الوقت .

      الخصائص الحركية الدوائية للدواء لها أهمية كبيرة في الاختيار والإدارة من دواء معين لمريض معين.

      & middot معظم الأدوية المستخدمة اليوم يمكن تصنيفها على أنها ضعيفة الأحماض أو القواعد. دواء و rsquos يمكن أن تؤثر خصائص القاعدة الحمضية بشكل كبير على توزيعها الحيوي وتقسيمها مميزات، لأن الاختلافات في الأس الهيدروجيني في الأجزاء المختلفة (الأنسجة / السوائل) من الجسم قد تغير درجة تأين هذه الأدوية.

      • & middot يتم تصنيع بعض الأدوية داخل الجسم (على سبيل المثال ،
      • الهرمونات) على الرغم من أن الغالبية ليست كذلك.
      • قد تكون الأدوية صلبة في درجة حرارة الغرفة أو سائلة أو غازية. تلعب الطبيعة الفيزيائية للدواء دورًا مهمًا في تحديد أفضل طريق لهالادارة.
      • & middot تتفاعل معظم الأدوية مع جزيء معين في
      • النظام البيولوجي (جسم الإنسان) المسؤول عن تنظيم الوظيفة البيولوجية / الفسيولوجية. هذا الجزيء الذي هو موقع عمل الدواء، يُعرف باسم المستقبلات.
      • & middot للتفاعل الكيميائي مع مستقبلاته ، العقار
      • يجب أن يكون للجزيء الخصائص الضرورية ليتم نقلها من موقع إدارتها إلى موقع عملها. يجب أيضًا أن يكون لها الحجم المناسب ، والشحنة الكهربائية ، والشكل ، والتركيب الذري لكي تتلاءم وترتبط بالموقع النشط لمستقبلها.
      • & middot سيُظهر جزيء الدواء المثالي خصائص ارتباط مواتية للمستقبل ، وسيكمن التوازن على اليمين ، حيث مجمع مستقبلات الدواء معًا (وبالتالي يمكن أن يؤدي في الواقع إلى استجابة دوائية) بدلاً من "عقار" و "مستقبل" منفصل.
      • & middot بعد استجابة دوائية ، فإن
      • من المتوقع أن ينفصل الدواء عن المستقبل ويعود إلى الدوران الجهازي ليتم التخلص منها من الجسم.

      & middot وبعبارة أخرى ، فإن الاستخدام المعتاد للعقاقير في العلاج يستدعي أن يستمر تأثير الدواء و rsquos لفترة زمنية محدودة. ثم ، إذا تم تكرارها ، فسيتم إعطاء الدواء مرة أخرى. إذا كان المريض لا يتحمل الدواء بشكل جيدبل إن الأمر الأكثر أهمية هو أن الدواء ينفصل عن المستقبل ويخرج من الجسم.

      • هذه الصورة هي ملف مولدة بالحاسوب تصوير جزيء الدواء في "جيب" المستقبل:
      • هذه الصورة هي ملف الأشعة السينية الفعلية لمركب مستقبلات الدواء:
      • تُظهر هذه الصورة جزيء دواء فريدًا إلى حد ما بسبب روابط تساهمية تتشكل. يرتبط هذا السيفالوسبورين تساهميًا ببيتا لاكتام للمستقبل.

      1) يجب أن يكون جزيء الدواء تناسب موقع الربط .

      2) يجب أن يكون جزيء الدواء تكوين روابط كيميائية (أو بعبارة أخرى ، قم بإجراء الاتصالات الصحيحة مع بقايا الأحماض الأمينية) في موقع الربط.

      & middot انتقائية الأدوية ، والمعروفة أيضًا باسم الربط الانتقائي للدواء ، تشير إلى عدد أنواع المستقبلات أو الأنواع الفرعية التي يرتبط بها الدواء في الجسم.

      & middot يتم قياس انتقائية الأدوية عادة عن طريق مقارنة التقاربات الملزمة للدواء بأنواع / أنواع فرعية مختلفة من المستقبلات.

      • & middot يشير التقارب الملزم (أو التقارب) للدواء إلى
      • قدرته على التوافق والالتزام بجيب المستقبل (أي موقع ارتباط الدواء و rsquos على جزيء المستقبل).

      & · انتقائية الدواء هي مصطلح نسبي. على سبيل المثال ، لنفترض أن عقارًا معينًا قد يرتبط بـ 5 مستقبلات. لا يزال يعتبر انتقائيًا لأنه لا يوجد سوى 5 مستقبلات من أصل تريليون!

      & middot تُعزى انتقائية الأدوية إلى ما يلي:

      1) ترتبط الأدوية بنوع واحد أو عدة أنواع / أنواع فرعية من المستقبلات أكثر إحكامًا من الآخرين.

      2) المستقبلات التي ترتبط بالعقاقير تتحكم في العمليات الخلوية المنفصلة التي ينتج عنها تأثيرات مميزة.

      & middot Drug Specificity تشير إلى عدد التأثيرات (المفيدة / العلاجية والسامة) التي يستطيع الدواء إنتاجها في الجسم.

      ولكي يكون الدواء محددًا ، يجب أن ينتج تأثيرًا واحدًا محددًا في الجسم. وبالتالي، لا يوجد دواء محدد! جميع الأدوية لها أكثر من تأثير في الجسم!

      • و middotلا يوجد دواء يسبب تأثيرًا محددًا واحدًا فقط.
      • ويعزى ذلك إلى ما يلي:
      • 2) حتى لو كان الدواء انتقائيًا كيميائيًا (أي هيكليًا) في الارتباط بنوع واحد فقط من
      • مستقبل عادة ما تحدث عمليات ما بعد المستقبل البيوكيميائية التي يتم التحكم فيها بواسطة هذا الارتباط في أنواع خلايا متعددة وتقترن بالعديد من الوظائف الكيميائية الحيوية الأخرى. نتيجة لذلك ، من المرجح أن يكون هناك أكثر من تأثير للدواء.
      • & middot الغالبية العظمى من الأدوية لها أوزان جزيئية
      • بين 100 و 1000. من أجل تحقيق الارتباط الانتقائي لجزيء الدواء لنوع واحد فقط من المستقبلات، يجب أن يكون الدواء ، في معظم الحالات ،
      • وزن جزيئي لا يقل عن 100. الأدوية التي يزيد وزنها الجزيئي عن 1000 لن ينتشر
      • ونتيجة لذلك ، يجب أن تدار الأدوية الكبيرة جدًا (مثل البروتينات) بسهولة بين أجزاء الجسم ، مباشرة في حجرة الجسم حيث تمارس تأثيرها الدوائي.

      و · تتفاعل الأدوية مع المستقبلات من خلال الارتباط بها من خلال الروابط الكيميائية.

      • هناك ثلاثة أنواع رئيسية من روابط مستقبلات الدواء:
      • 1) التساهمية
      • 2) كهرباء
      • 3) مسعور

      & middot يعتبر الارتباط الكهروستاتيكي أكثر شيوعًا من الارتباط التساهمي في تفاعلات مستقبلات الأدوية. الروابط الكهروستاتيكية أضعف من الروابط التساهمية ، فهي (الروابط الكهروستاتيكية) تختلف من روابط أيونية قوية نسبيًا بين الجزيئات الأيونية المشحونة ، إلى روابط هيدروجينية أضعف ، وتفاعلات ثنائية القطب مستحثة ضعيفة جدًا مثل قوى فان دير فال.

      & middot الروابط الكارهة للماء عادة ما تكون ضعيفة للغاية. إنها مهمة في تفاعلات الأدوية المحبة للدهون بدرجة عالية مع طبقات الفسفوليبيد ثنائية أغشية الخلايا ، كما أنها مهمة في تفاعل الأدوية مع الموقع النشط أو المستقبلات.

      & middot الأدوية التي ترتبط من خلال الروابط الضعيفة بمستقبلاتها تكون عمومًا أكثر انتقائية في ارتباطها من الأدوية التي ترتبط من خلال روابط قوية جدًا. يُعزى هذا إلى حقيقة أن الروابط الضعيفة تتطلب ملاءمة دقيقة جدًا للدواء في الجيب النشط لمستقبله في حالة حدوث تفاعل. من المرجح أن يوفر عدد محدود جدًا من أنواع المستقبلات مثل هذا التوافق الدقيق لهيكل دواء معين. من المرجح أن تكون جزيئات الدواء التي تشكل روابط ضعيفة مع المستقبلات انتقائية للغاية وقصيرة المفعول. (الأدوية الانتقائية للغاية هي دائمًا أفضل الأدوية ولماذا؟)

      وفق ويكيبيديا، "الأيزومرات المجسمة هي جزيئات أيزومرية لها الامتداد نفس الصيغة الجزيئية وتسلسل الذرات المترابطة (تكوين) ، ولكنها تختلف فقط في الاتجاهات ثلاثية الأبعاد من ذراتهم في الفضاء. تشترك الأيزومرات الهيكلية في نفس الصيغة الجزيئية ، لكن روابط الرابطة و / أو ترتيبها بين الذرات / المجموعات المختلفة يختلف. في الأيزومرات الفراغية ، تظل روابط النظام والرابطة للذرات المكونة كما هي ، لكن اتجاهها في الفضاء يختلف. "

      & middot الكيمياء الفراغية للمستقبل هي ثابت . شيء لا يمكن التلاعب به. ومع ذلك ، يمكن تغيير الدواء. يمكنك اختيار أي دواء ، مع كيمياء مجسمة محددة ، لتطبيقه على الجسم.

      • & middot بالنظر إلى حقيقة أن chirality (الفراغية) هو
      • ظاهرة شائعة للغاية في الطبيعة وفي علم الأحياء ، فليس من المستغرب ذلك معظم الأدوية مراوان (غير متماثل). يتوفر عدد من الأدوية اللولبية المستخدمة سريريًا / يتم إعطاؤها كمخاليط راسيمية ، أي مخاليط من الأيزومرات البصرية و rsquo أو المتشابهة (على سبيل المثال ، S- و R- ايبوبروفين ، S- و R- الوارفارين ، R- و S-verapamil )، في حين أن
      • يتم تسويق الباقي على أنه متماثل نشط واحد.

      • و middot في معظم الحالات ، يكون أحد الأدوية المتشابهة أكثر فاعلية من الآخر ، مما يعكس أفضل & lsquofit & rsquo لجزيء المستقبل.

      مثال آخر هو (-) الإبينفرين الذي يُظهر نشاط مضيق للأوعية من 12 إلى 15 مرة أكثر من (+) الإبينفرين. توجد أمثلة أخرى عديدة في الأدب.

      (فكر في موقع المستقبل كما لو كان & lsquoglove & rsquo الذي يجب أن يتناسب فيه جزيء الدواء لإحداث تأثيره !!)

      & middot آخر نتيجة مهمة من المخدرات chirality هو ذلك قد لا يكون المتشاهد / الأيزومر الفراغي النشط أو الأكثر نشاطًا في نوع واحد من موقع المستقبل نشطًا (أو أكثر نشاطًا) في نوع آخر من موقع المستقبل (على سبيل المثال ، نوع المستقبل الذي قد يكون مسؤولاً عن بعض الآثار الجانبية غير المرغوب فيها) ، عند مقارنته بالأيزومر الآخر.

      • على سبيل المثال ، الايزومرات dextrorotatory
      • ((+) enantiomers) في سلسلة أدوية المورفين ، مثل ديكستروميثورفان ، هي مثبطات للسعال تمتلك مضادات السعال.
      • خواص الكودايين (التي تحتوي على مادة مسكنة ، (-) ، الكيمياء الفراغية) ، بدون خصائص المسكنات ، والإدمان ، والمثبطات المركزية ، والإمساك
      • معروض من خلال النموذج (-). الشكل (+) ببساطة لا يرتبط بالمستقبلات المتضمنة في المسكنات ، الإمساك ، الإدمان ، وغيرها من الإجراءات التي يمارسها النموذج (-). نتيجة لذلك ، حل ديكستروميثورفان إلى حد كبير محل العديد من مضادات السعال القديمة ، بما في ذلك الكودايين ، في مستحضرات السعال الموصوفة وغير الموصوفة.
      • مثال آخر هو مخدر موضعي levobupivacaine ، وهو (S) أيزومر بوبيفاكين. Bupivacaine متوفر في السوق إنه المزيج الراسيمي من (R)
      • و (S) أيزومرات. كل من (R) و (S)
      • الأيزومرات لها نشاط مخدر موضعي جيد ، لكن أيزومر (R) يسبب انخفاض عضلة القلب وعدم انتظام ضربات القلب البطيني. في المقابل ، يظهر أيزومر (S) أقل بكثير من سمية القلب. وبالتالي ، فإن
      • الأيزومر النقي (S) من بوبيفاكائين متاح الآن في السوق بسبب ملف الأمان الفائق الخاص به.
      • & middot يتوفر عدد من الأدوية / يتم تسويقها كمخاليط راسيمية (خليط راسمي
      • خليط 50:50 من (-) و (+) enantiomers).
      • في بعض الحالات ، وللأسف ، يتلقى المريض جرعات من الأدوية يكون 50٪ منها إما غير فعال أو سام. نتيجة لذلك ، هناك قدر كبير من الاهتمام ، في كل من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية وصناعة الأدوية ، بإتاحة المزيد من الأدوية اللولبية مثل
      • صكوكها النشطة النقية.
      • & middot قد تكون مثيرة مثل الأمثلة المذكورة أعلاه من الانتقائية الفراغية ، في بعض الأحيان قد لا تكون كذلك
      • فعالة من حيث التكلفة لحل الدواء في متغيراته النقية. في بعض الحالات ، من الصعب استنتاج أن أيزومر واحد للدواء يتفوق عليه
      • الأخرى.
      • على سبيل المثال ، يعتبر S-verapamil حاصراً لقنوات الكالسيوم أكثر نشاطاً من R-verapamil ، ولكن الأول يتم استقلابه بشكل أسرع من خلال تأثير المرور الأول في الكبد ، وهذا يعني أن R-verapamil يحتوي على الكثير.
      • توافر حيوي أعلى من S الأكثر نشاطًا
      • أيزومر (أي من الأيزومرين متفوق إكلينيكيًا ؟؟).
      • على سبيل المثال ، يتم بيع NSAID ibuprofen باسم
      • خليط راسمي. إس - ايبوبروفين هو الايزومير النشط المضاد للالتهابات (مثبط لانزيمات الأكسدة الحلقية). من ناحية أخرى ، يمتلك أيزومر R نشاطًا مسكنًا يعمل بشكل مركزي ، ولكنه يتحول بشكل استقلابي إلى أيزومر S في الجسم الحي.

      و middot المناهضون هي الأدوية التي ترتبط بالمستقبل وتنشطه ، مما يؤدي إلى التأثير الدوائي.

      يمكن لبعض المستقبلات ، بمجرد تنشيطها ، أن تحدث التأثير الدوائي مباشرة ، مثل حالة الإنزيمات والقنوات الأيونية.

      ترتبط مستقبلات أخرى من خلال واحد أو أكثر من جزيئات الاقتران بجزيء مستجيب منفصل نتيجة لذلك ، سيؤدي تنشيط هذا النوع المعين من المستقبلات إلى إحداث التأثير الدوائي بشكل غير مباشر.

      المفعول هو أحد مكونات مسار تحويل الإشارة الذي ينتج التأثير البيولوجي بعد تنشيط المستقبل بواسطة ناهض غالبًا قناة أيونية أو جزيء إنزيم).

      • و middot تحاكي بعض الأدوية تأثير المستقبلات
      • ناهض عن طريق تثبيط الجزيئات المسؤولة عن إنهاء عمل ناهض داخلي (على سبيل المثال ، مثبطات الفوسفوديستيراز ، مثبطات أستيل كولينستراز).

      و middot المؤيدين الكامل هي الأدوية التي يمكن أن تنشط نظام المستقبلات-المستجيب إلى أقصى حد يكون النظام قادرًا عليه عند تناوله بتركيزات عالية بما فيه الكفاية. نتيجة لذلك ، ينتج عن ناهض كامل التأثير الدوائي الأقصى في نظام مستقبلات المستجيب. المنبهات الكاملة تظهر فعالية عالية و lsquo جوهرية و rsquo.

      • و middot المنافع الجزئية هي الأدوية التي تربط و
      • تنشيط المستقبل ومع ذلك ، فإن الاستجابة أو التأثير المحرض ليس مرتفعًا مثل التأثير الذي تم الحصول عليه من ارتباط ناهض a & lsquofull & rsquo. بالتالي، قد يعمل ناهض جزئي إما & lsquoagonist & rsquo (inعدم وجود ناهض كامل) أو باعتباره & lsquoantagonist & rsquo(في وجود ناهض كامل). المنبهات الجزئية تظهر فعالية منخفضة & lsquo جوهرية & rsquo (الفعالية الجوهرية مستقلة عن تقارب المستقبل).
      • و middot التحليلات الصيدلانية، المعروف أيضًا باسم & lsquo Blockers & rsquo أو & lsquo مستقبلات محددة
      • الخصوم ، و rsquo الأدوية التي ترتبط بها
      • نفس موقع ارتباط الناهض على جزيء المستقبل بدونتفعيل المستقبلوبالتالي منع (أو منع)
      • ربط الجزيئات الناهضة (ومنع تنشيط المستقبل بواسطة ناهض).
      • في النهاية ، تمنع / تقلل من تأثيرات جزيئات ناهض المستقبلات
      • المخدرات في الجسم.
      • يمكن أن تكون المضادات الدوائية إما & lsquo مناهضًا تنافسية & rsquo أو & lsquo غير تنافسية
      • الخصوم و rsquo.
      • إن المضاد الدوائي خاص بالمستقبلات لأنه يتفاعل مع نفسه
      • المستقبل كما ناهض يعاديه.

      و middot مضادات التباين تُعرف أيضًا باسم مثبطات Allosteric أو مضادات التعددية المحددة للمستقبلات أو مضادات التعددية غير التنافسية.

      هم أن المخدرات تثبيط / تقليل فعالية / ألفة ربط ناهض المستقبل من خلال الارتباط بمواقع خيفي على جزيء المستقبل (على سبيل المثال ، الارتباط بمواقع مختلفة عن موقع ربط الناهض وبعيدًا عنه). بعبارة أخرى ، هم مناهضون غير تنافسيين يرتبطون إما بشكل عكسي أو لا رجعة فيه بمواقع الارتباط الخيفي الخاصة بهم على جزيء المستقبل.

      المضاد الخيفي خاص بالمستقبلات لأنه يتفاعل مع نفس المستقبل الذي يعاديه الناهض.

      التثبيط / العداء الخيفي هو ليس يتم التغلب عليها عن طريق زيادة تركيز / جرعة ناهض.

      & middot تعتبر المفاهيم الحديثة لتفاعلات المستقبلات الدوائية أن للمستقبل شكلين على الأقل: Ri (غير نشط) و Ra (نشط).

      & middot في شكل Ri ، يكون المستقبل غير نشط / غير وظيفي ولا ينتج عنه أي تأثير ، حتى عندما يقترن بجزيء دواء (D).

      • & middot في صيغة Ra ، يمكن للمستقبل أن ينشط
      • المؤثرات وتنتج تأثيرًا ، حتى في حالة عدم وجود رابط / دواء.

      و middot في حالة عدم وجود ligand ، يوجد المستقبل في حالة توازن (Ri + Ra) بين التشكيلين. يحدد التوازن بين شكلي Ri و Ra درجة النشاط التكويني الناتج عن المستقبل.

      & middot العوامل الأخرى التي تدخل في تحديد درجة النشاط التكويني تشمل كثافة المستقبلات ، وتركيز جزيئات الاقتران (إذا كان نظامًا مقترنًا) ، وعدد جزيئات المستجيب في النظام.

      و middot تشير الدراسات / الاعتبارات الديناميكية الحرارية إلى أن ، في حالة عدم وجود أي يجند، يُفضل الشكل Ri للمستقبل (أكثر استقرارًا) وأن نسبة صغيرة من جزيئات المستقبل موجودة في Ra في بعض الأوقات.

      & middot تُظهر أنظمة المستقبلات في البشر مستوى منخفضًا من النشاط التكويني في حالة عدم وجود ناهض ، مما يؤكد أن هذه المستقبلات موجودة في حالة توازن (Ri + Ra) مع وجود معظم جزيئات المستقبلات في شكل Ri وعدد قليل فقط من جزيئات المستقبل في شكل Ra.

      و middot ناهضات كاملة لديهم تقارب أعلى بكثير للارتباط بتشكل Ra وقادرون على تثبيته بشكل كامل (أي أن لديهم فعالية جوهرية عالية).

      • & middot يفضل ربط ناهضات كاملة تكوين مجمع Ra-D مع تأثير ملحوظ أكبر بكثير.
      • نتيجة لذلك ، تسبب الناهضات الكاملة تحولًا لكل مجموعة المستقبلات إلى تجمع Ra-D عند تناولها بتركيزات عالية بما فيه الكفاية ، مما يؤدي إلى
      • التفعيل الكامل لنظام المستجيب وإنتاج التأثير الدوائي الأقصى.

      و middot ناهضات جزئية لها تقارب متوسط ​​للارتباط بكل من شكلي Ri و Ra (Ra-D + Ri-D) ، مع تقارب أكبر إلى حد ما مع نموذج Ra.

      • & middot هم لا يثبتون شكل Ra تمامًا مثل ناهضات كاملة ، لذلك يوجد جزء كبير من جزيئات المستقبل في تجمع Ri-D (على سبيل المثال ، المنبهات الجزئية تظهر فعالية جوهرية منخفضة). ك
      • النتيجة ، ناهض جزئي ينتج أقل من التأثير الكامل في موقع المستقبل ، حتى عندما يشبع جزيئات المستقبل.

      و middot فارماكولوجي الخصوم لها ألفة متساوية للارتباط بكل من شكلي Ra و Ri لجزيء المستقبل.

      & middot يقوم ارتباط المضاد بإصلاح كسور مجمعي Ri-D و Ra-D بنفس الكميات النسبية كما هو الحال في حالة عدم وجود أي عقار (أي أن ارتباط المضاد لا يؤدي إلى إزاحة Ra مقابل توازن Ri). نتيجة ل، لن يلاحظ أي تغيير في التأثير (على سبيل المثال ، يتم الحفاظ على نفس المستوى من النشاط التأسيسي).

      & middot ومع ذلك ، فإن ارتباط المضاد يحجب موقع المستقبل و يمنع منبهات من الارتباط.

      و middot ناهضات معكوسة لديهم تقارب أعلى بكثير للارتباط مع شكل Ri غير النشط لجزيء المستقبل وقادرون على تثبيته.

      & middot يؤدي ربط ناهضات معكوسة إلى تثبيت جميع جزيئات المستقبلات في تجمع Ri-D (ويمنع التحول إلى حالة Ra). نتيجة لذلك ، تقلل المنبهات العكسية / تقضي على أي نشاط تأسيسي و قد تنتج تأثيرات معاكسة للتأثيرات التي تنتجها ناهضات تقليدية في ذلك المستقبل.

      & middot يتم إنهاء عمل الدواء على مستوى المستقبل بإحدى الآليات التالية:

      1) تفكك الدواء عن المستقبلات. في بعض الحالات ، يؤدي التفكك تلقائيًا إلى إنهاء التأثير الدوائي للعقار في حالات أخرى ، وقد يستمر التأثير لفترة من الوقت بعد التفكك (عندما ، على سبيل المثال ، لا يزال جزيء الاقتران موجودًا في شكل نشط).

      2) التخليق الحيوي لجزيئات المستقبلات الجديدة. في حالة الأدوية التي ترتبط تساهميًا بالمستقبلات ، قد يستمر التأثير حتى يتم تدمير معقد مستقبلات الدواء ويتم تصنيع جزيئات المستقبلات الجديدة حيوياً.

      & middot جسم الإنسان مليء بالجزيئات الذاتية القادرة على الارتباط بالأدوية. من المهم التمييز ، مع ذلك ، بين ارتباط جزيء الدواء بـ & lsquo مستقبل & [رسقوو] وربط الدواء إلى & lsquo موقع ملزم خامل & [رسقوو].

      - المستقبل هو عادة جزيء تنظيمي داخلي يجب أن يكون انتقائي في الارتباط بالرابطات (جزيئات الدواء والمواد الغريبة الحيوية الأخرى) ، ويجب تغيير وظيفتها عند التنشيط (الربط) من أجل تغيير الوظيفة أو الاستجابة البيولوجية.

      - ربط الدواء بجزيء خامل غير منظم في الجسم (على سبيل المثال ، الألبومين في البلازما) لن يغير الوظيفة البيولوجية أو الاستجابة لهذه الجزيئات الذاتية الخاملة التي يمكن أن ترتبط بالأدوية تُعرف باسم مواقع الربط الخاملة .

      على الرغم من أن هذا النوع من الارتباط الدوائي لا ينتج عنه تأثير دوائي ، إلا أنه ذو أهمية حركية دوائية كبيرة لأنه يؤثر على توزيع الدواء في الجسم وكمية عقار & lsquofree & rsquo المتوفر في الدورة الدموية العامة.

      و middot معظم المستقبلات البروتينات . توفر هياكل البولي ببتيد كلاً من التنوع الكيميائي والخصوصية اللازمة لتفاعل مستقبلات ليجند.

      تتضمن أمثلة مستقبلات الأدوية :

      1) البروتينات المنظمة ، التي تتوسط في إجراءات الإشارات الكيميائية الذاتية مثل الناقلات العصبية ، و autacoids ، والهرمونات.

      2) الانزيمات (على سبيل المثال ، إنزيم اختزال ثنائي هيدروفولات هو مستقبل عقار ميثوتريكسات المضاد للسرطان).

      3) بروتينات النقل (على سبيل المثال ، Na + / K + ATPase هو مستقبل الغشاء لجليكوسيدات الديجيتال المقوي للقلب).

      4) البروتينات الهيكلية (على سبيل المثال ، توبولين هو مستقبل للكولشيسين).

      • & middot & lsquoreceptor & rsquo المفهوم هو محور التركيز
      • تقصي تأثيرات الأدوية وآليات عملها (الديناميكا الدوائية). اليوم ، كثير
      • تم بالفعل عزل وتمييز مستقبلات الأدوية ، مما يسمح بفهم أكبر للأساس الجزيئي لعمل الدواء.
      • 1) المستقبلات مسؤولة إلى حد كبير عن إقامة العلاقات الكمية بين جرعة أو تركيز الدواء وتأثيراته الدوائية. تقارب المستقبلات و rsquos للارتباط بـ
      • يحدد جزيء الدواء تركيز الدواء المطلوب لإنتاج عدد كبير من مجمعات مستقبلات الدواء ، والتي ستؤثر على الدواء
      • تأثير. بالإضافة إلى ذلك ، قد يحد العدد الإجمالي لجزيئات المستقبلات المتاحة من التأثير الأقصى الذي يمكن أن ينتجه جزيء الدواء.
      • 2) المستقبلات هي المسؤولة عن الانتقائية من عمل المخدرات. هناك مجموعة واسعة من المستقبلات المختلفة كيميائيًا (مواقع الارتباط) المتاحة لجزيء الدواء في الخلية أو الأنسجة. تحدد كيمياء جزيء الدواء ما إذا كان الدواء قادرًا على الارتباط بمستقبل معين ، كما تحدد كيمياء جزيء الدواء تقارب الدواء و rsquos
      • للارتباط بمستقبل معين. وبالتالي ، يمكن أن تؤدي تعديلات التركيب الكيميائي لدواء ما إلى زيادة أو تقليل ارتباطات الدواء و rsquos لفئات مختلفة من المستقبلات وتغيير آثاره العلاجية والسامة.
      • 3) المستقبلات تتوسط في أفعال كليهما ناهضات و الخصوم . تتفاعل بعض الأدوية والعديد من الروابط الطبيعية (مثل النواقل العصبية والهرمونات)
      • مع المستقبلات كمنبهات ، أي أنها تنشط المستقبل وتنتج تأثيرًا كنتيجة مباشرة للارتباط بالمستقبل. تتفاعل أدوية أخرى
      • مع المستقبلات كمناهضات.
      • & middot العلاقة بين جرعة الدواء ومقداره
      • التأثير العلاجي للمريض معقد إلى حد كبير. ومع ذلك ، في نظام المختبر (على سبيل المثال ، زراعة الخلايا) ، تكون العلاقة بين تركيز الدواء وتأثيره بسيطة ويمكن وصفها بواسطة منحنى الاستجابة للجرعة المتدرج (القطعي
      • أو السيني) بناءً على المعادلة التالية:
      • ه = التأثير الذي لوحظ عند التركيز C.
      • إيماكس = الاستجابة القصوى التي يمكن أن ينتجها الدواء.
      • EC50 = تركيز الدواء المنتج
      • 50٪ من التأثير الأقصى.

      & middot أثناء تفاعل الدواء مع المستقبلات ، ترتبط ناهضات الأدوية بجزيئات المستقبلات ذات الصلة المميزة للمستقبل أو تشغلها. يمكن أيضًا وصف العلاقة بين الدواء المرتبط بجزيئات المستقبل (B) وتركيز الدواء الحر (غير المرتبط) (C) من خلال منحنى ملزمة للجرعة متدرج (قطعي أو سيني) بناءً على المعادلة التالية:

      • ب = الدواء مرتبط بجزيئات المستقبلات.
      • ج = تركيز عقار مجاني (غير منضم).
      • بالأعلى= التركيز الكلي لمواقع المستقبلات المرتبطة بالدواء بتركيزات عالية لا متناهية من الدواء الحر.
      • كد= & lsquoEquilibrium التفكك ثابت و rsquo
      • تركيز الدواء الحر الذي عنده يتم ملاحظة 50٪ من الحد الأقصى للارتباط.

      و middot هالأعلى يميز فعالية الدواء (أي الفعالية الدوائية) على النحو التالي:

      • لو هالأعلى منخفضة ، وفعالية الدواء منخفضة.
      • لو هالأعلى عالية ، وفعالية الأدوية عالية.

      EC50 يميز فاعلية الدواء على النحو التالي:

      • لو EC50 منخفض ، فاعلية الدواء عالية.
      • لو EC50 مرتفع ، فاعلية الدواء منخفضة.

      كد يميز تقارب المخدرات و rsquos للالتزام بالمستقبل على النحو التالي:

      • لو كد منخفض ، تقارب الربط مرتفع.
      • لو كد مرتفع ، وتقارب الربط منخفض.

      • & middot بيانات الاستجابة للجرعة (أو تأثير الجرعة) هي عادةً
      • قدمت على أنها أ منحنى السيني لتأثير الدواء (التنسيق) كدالة في لوغاريتم الجرعة أو التركيز (الإحداثي).

      & middot يؤدي ارتباط جزيء الدواء بمستقبلات إلى تغيير توافقي في المستقبل ، وهي أولى الخطوات العديدة المطلوبة لإنتاج استجابة دوائية. تُعرف عملية النقل بين شغل جزيئات المستقبلات واستجابة الدواء باسم & lsquo اقتران & rsquo (أو اقتران الإشغال والاستجابة ).

      & middot تتحدد كفاءة عملية الاقتران بالعوامل التالية:

      1) التغيير التوافقي الأولي في المستقبل. نتيجة لذلك ، يؤدي التغيير المطابق (الإشغال) الذي ينتج عن ربط ناهض كامل إلى اقتران استجابة إشغال أكثر كفاءة بكثير من التغيير المطابق الذي ينتج عن ارتباط ناهض جزئي.

      2) الأحداث البيوكيميائية التي تنقل إشغال المستقبل إلى استجابة خلوية ومدى كفاءة (أو تعقيد) هذه الأحداث.

      • & middot قد تكون الكفاءة العالية لتفاعل الدواء مع المستقبل
      • كما يعزى إلى وجود مستقبلات احتياطية .

      على سبيل المثال ، يمكن استحضار أقصى استجابة مؤثرة في التقلص العضلي لعضلة القلب تجاه الكاتيكولامينات حتى لو كان 90٪ من مستقبلات ب الأدرينالية مشغولة بمضاد لا رجعة فيه. وفقًا لذلك ، يُقال إن خلايا عضلة القلب تحتوي على عدد كبير من مستقبلات ب الأدرينالية الاحتياطية.

      & middot يقال إن المستقبلات الاحتياطية موجودة إذا كان التأثير الدوائي الأقصى (E.الأعلى) يتم الحصول عليها بأقل من الحد الأقصى للاحتلال لجزيئات المستقبلات (بالأعلى).

      & middot يتم تحديد وجود المستقبلات الاحتياطية بمقارنة تركيز 50٪ من التأثير الأقصى (EC50) بتركيز 50٪ من الحد الأقصى للربط (K.د). إذا كان EC50 أقل من K.ديقال أن المستقبلات الاحتياطية موجودة . هذا يعني أنه لتحقيق 50٪ من التأثير الأقصى في نظام به مستقبلات احتياطية ، يجب تنشيط أقل من 50٪ من جزيئات المستقبل. إذا كان EC50 وكد متساوية ، المستقبلات الاحتياطية غير موجودة .

      & · حضور مستقبلات احتياطية قد يكون نتيجة لإحدى آليتين:

      1) قد تكون مدة تنشيط المستجيب أكبر بكثير من مدة تفاعل الدواء مع المستقبل.

      2) قد يتجاوز العدد الفعلي لجزيئات المستقبل عدد جزيئات المستجيب المتاحة.

      & middot حساسية الخلية أو الأنسجة إلى تركيز معين من ناهض يعتمد على كليهما:

      • 1) إن تقارب المستقبلات للربط بالناهض (الذي يتميز بـ K.د) و
      • 2) تي هي درجة انتشار المستقبلات . & lsquodegree of spareness & rsquo هو العدد الإجمالي لجزيئات المستقبلات الموجودة مقارنة بعدد جزيئات المستقبلات اللازمة بالفعل للحصول على استجابة بيولوجية قصوى (أي عدد جزيئات المستقبل الاحتياطية الموجودة).
      • و middot المضاد الدوائي s ترتبط بنفس موقع الارتباط للناهض على جزيء المستقبل دون تنشيط المستقبل (أو بدون تنشيط نظام المستجيب لذلك المستقبل). ينتج التأثير المضاد لهذه الجزيئات عن قدرتها على منع ناهضات (ناهضات الأدوية أو
      • منبهات داخلية المنشأ) من الارتباط بالمستقبلات وتفعيلها.

      الخصوم التنافسية يرتبط بنفس موقع الارتباط للناهض على جزيء المستقبل بطريقة قابلة للانعكاس دون تنشيط نظام المستجيب لذلك المستقبل.

      • العداء التنافسي يعتمد على التركيز. زيادة تركيزات الخصم التنافسي ، في وجود تركيز ثابت للناهض ، سيؤدي إلى حدوث تدريجي
      • إن تقليل أو تثبيط التأثير الناهض للتركيزات العالية للمضاد التنافسي سيقضي تمامًا على التأثير الناهض.
      • تركيزات عالية بما يكفي من ناهض الإرادة
      • تحل محل المضاد وتنشيط المستقبل بالكامل. نتيجة لذلك ، سوف يلغي الناهض تمامًا التأثير المضاد لتركيز معين من الخصم التنافسي . في هذه التركيزات العالية من ناهض ، ناهض Eالأعلى يبقى كما هو بالنسبة لأي تركيز ثابت للمضاد.

      & lsquoblocking & rsquo (أو مثبط) تأثير أ الخصم التنافسي يعتمد على تركيزه. المرضى المختلفون الذين يتلقون جرعة ثابتة من المضاد التنافسي أو & lsquoblocker & rsquo (على سبيل المثال ، بروبرانولول) تظهر مستويات مختلفة من البلازما ، بسبب الاختلافات في إزالة المضاد. نتيجة ل، قد تختلف التأثيرات العدائية للمانع التنافسي بشكل كبير بين المرضى ، ويجب تعديل الجرعة وفقًا لذلك.

      تعتمد الاستجابة السريرية للخصم التنافسي أيضًا على تركيز الناهض (على سبيل المثال ، lsquonorepinephrine & rsquo في حالة بروبرانولول). ستؤدي الزيادة في تركيز الناهض إلى انخفاض التأثير العدائي للمانع (وانخفاض تأثيره العلاجي) ، وقد تكفي الزيادة الكبيرة في تركيز المادة الناهضة لإلغاء التأثير المضاد للمانع. العداء التنافسي التي أظهرها الخصم.

      مضادات دوائية غير تنافسية يرتبط بالمستقبل دون تنشيطه (أو بدون تنشيط نظام المستجيب لذلك المستقبل).

      مضادات دوائية غير تنافسية يرتبط بشكل لا رجعة فيه بنفس موقع الارتباط للناهض على جزيء المستقبل.

      في بعض الحالات ، يُعزى الارتباط غير القابل للعكس إلى التقارب العالي للغاية للمضاد للارتباط بمواقع المستقبلات نتيجة لذلك ، فإن المستقبل غير متاح عمليًا للارتباط بالناهض. في حالات أخرى ، ترتبط المضادات بشكل لا رجعة فيه لأنها تشكل روابط تساهمية مع مواقع مستقبلاتها.

      على عكس تأثيرات الخصم التنافسي ، فإن تأثيرات لا يمكن التغلب على المضاد الذي لا رجعة فيه عن طريق زيادة تركيز / جرعة الناهض.

      مرة واحدة خصم لا رجوع فيه يرتبط بعدد من جزيئات المستقبلات ، وقد لا يكون عدد جزيئات المستقبل غير المشغولة كافيًا للناهض لممارسة تأثيره الأقصى. نتيجة ل، خصوم لا رجعة فيه تسبب انحرافًا هبوطيًا للحد الأقصى في منحنى الاستجابة للجرعة الناهضة (لا يوجد تحول في المنحنى على محور الجرعة / التركيز إلى جرعات / تركيزات أعلى ما لم تكن هناك مستقبلات احتياطية).

      في حالة وجود مستقبلات احتياطية ، فإن جرعة منخفضة من خصم لا رجوع فيه من المحتمل أن تترك جزيئات مستقبلات غير مشغولة كافية للناهض لممارسة أقصى تأثير.

      سريريا ، هناك ميزة في استخدام خصم لا رجوع فيه في العلاج (على سبيل المثال ، فينوكسي بنزامين ، وهو مضاد لا رجعة فيه لمستقبلات الأدرينالية). بمجرد احتلاله للمستقبل ، فإن وجود الشكل غير المنضم لـ خصم لا رجوع فيه ليس مطلوبًا لتثبيط الاستجابات الناهضة. نتيجة ل، تعتمد مدة عمل المضاد الذي لا رجعة فيه إلى حد كبير على معدل دوران جزيئات المستقبل (لا معدل القضاء عليه).

      ميزة أخرى لاستخدام خصم لا رجوع فيه في العلاج هو قدرته على الحفاظ على الحصار أو تثبيط تأثير ناهض حتى في وجود تركيزات متفاوتة وعالية من ناهض.

      من عيوب استخدام ملف خصم لا رجوع فيه كعامل علاجي هو الحاجة إلى & lsquoantagonist & [رسقوو] الآثار الزائدة للمضاد في حالة جرعة زائدة.

      • & middot في حالة عدم وجود جزيئات مستقبلات احتياطية ، تحدث الاستجابة الدوائية القصوى عندما يكون
      • ناهض يرتبط بجميع جزيئات المستقبلات المتاحة. بناءً على هذه الاستجابة القصوى ، يمكن تصنيف ناهضات إلى فئتين رئيسيتين: ناهضات جزئية و ناهضات كاملة .

      • & middot تمنع ناهضات جزئية بشكل تنافسي ربط ناهضات كاملة في موقع المستقبل (على غرار التثبيط الناتج عن الصيدلاني التنافسي
      • خصم). نتيجة ل، يمكن استخدام ناهضات جزئية كمناهضات تنافسية. في الواقع ، فإن العديد من الأدوية المستخدمة سريريًا كمضادات تنافسية هي ناهضات جزئية.

      & middot العديد من مضادات الأدوية هي مضادات خاصة بالمستقبلات (تنافسية أو غير تنافسية) ، ولكن ليس كل منهم مستقبلات محددة. من المعروف أن آليتين أخريين لتضاد العقاقير تشمل العداء الكيميائي و العداء الفسيولوجي .

      و middot العداء الكيميائي يحدث عندما يعادي عقار واحد (المضاد الكيميائي) أفعال عقار ثانٍ عن طريق الارتباط بالعقار الثاني وإيقاف نشاطه. نتيجة لذلك ، فإن المضاد الكيميائي قادر على منع الدواء الثاني من الارتباط بموقع مستقبلاته.

      & middot لا يعتمد المضاد الكيميائي على التفاعل مع ناهض ومستقبلات rsquos (على الرغم من احتمال حدوث مثل هذا التفاعل).

      2) Dimercaprol هو مضاد كيميائي (أو خالب) للرصاص وبعض المعادن السامة الأخرى.

      3) البراليدوكسيم مضاد كيميائي لمثبطات الكولينستريز العضوي.

      & middot العديد من مضادات الأدوية هي مضادات خاصة بالمستقبلات (تنافسية أو غير تنافسية) ، ولكن ليس كل منهم مستقبلات محددة. من المعروف أن آليتين أخريين لتضاد العقاقير تشمل العداء الكيميائي و العداء الفسيولوجي .

      & middot طريقة أخرى لمقاومة تأثيرات دواء أو مادة داخلية هي الاستفادة من العداء الفسيولوجي الموجود بالفعل بين المسارات التنظيمية الذاتية في الجسم.

      & middot على عكس المضادات الدوائية ، يرتبط المضاد الفسيولوجي بجزيء مستقبلات مختلفة ، مما ينتج عنه تأثير معاكس للتأثير الذي ينتجه الدواء الذي يعاديه (يتفاعل المضاد الدوائي مع نفس المستقبلات مثل الدواء الذي يعاديه)


      افتراضات النموذج والمقارنات مع نماذج مستقبلات أخرى

      آلية ربط وتفعيل المستقبلات

      حاليًا ، يتم تصنيف المستقبلات الدوائية إلى أربع فئات رئيسية (من وضع العمل السريع إلى البطيء): 1) القنوات الأيونية المترابطة (مستقبلات التأين المؤثر وهي جزء من أهداف بروتين القناة الأيونية التي تشمل أيضًا بوابات الجهد والقنوات الأيونية الأخرى) ، 2 ) مستقبلات البروتين G (مستقبلات التمثيل الغذائي GPCRs) ، 3) المستقبلات التحفيزية (بما في ذلك مستقبلات التيروزين كينازات) ، و 4) مستقبلات الهرمونات النووية (Rang et al.، 2015 Alexander et al.، 2017). توجد الآن بيانات كيميائية حيوية وفيزيائية حيوية وبنيوية تشير إلى أن المستقبلات (على وجه الخصوص ، GPCRs) موجودة في توازن ديناميكي بين حالتها غير النشطة والنشطة. يمكن أن تكون نشطة إلى حد ما حتى في حالة خالية من الترابط (Changeux and Edelstein ، 2011) ، ويؤدي ربط الروابط إلى تغيير هذا التوازن (Hunyady et al. ، 2003). بشكل عام ، تكون المستقبلات الخالية من الترابط بشكل كبير في توافقها غير النشط ، تلك التي ليس لها نشاط تأسيسي هي كذلك تمامًا. يؤدي ربط ناهض إلى تحويل التوازن نحو ارتباط الحالة النشطة لناهض معكوس ينقله أكثر نحو الحالة غير النشطة (الشكل 4 ب).

      نموذج الدولتين الكامل ، الذي يسمح بالنشاط التأسيسي ، يتم تصوره تقليديًا على طول الخطوط الموضحة في الشكل 2 ، حيث يمكن للرابط إما الارتباط بالشكل غير النشط للمستقبل والمساهمة في تنشيطه (الملاءمة المستحثة ، الحث التوافقي) أو الارتباط بالشكل النشط للمستقبل وقفله بشكل تفضيلي في هذا الشكل (الاختيار التوافقي). تظهر ثوابت التوازن المقابلة في الشكل 2 بعد تدوين شائع الاستخدام (على سبيل المثال ، الشكل 1 في Trzeciakowski ، 1999b ، الشكل 1 في Roche et al. ، 2013 ، أو Eq.21 في Kenakin ، 2017) التي تفترض ligand كـ وجود & # x3b1- أضعاف تقارب مختلف للشكل النشط مقابل الشكل غير النشط. نظرًا لاعتبارات الديناميكا الحرارية المتعلقة بالحلقة ، لا يوجد سوى ثلاث معلمات مستقلة: كد = [L] [R] / [LR] و كد/& # x3b1 = [L] [LR *] / [LR *] هي ثوابت تفكك التوازن لشكل المستقبلات النشطة وغير النشطة ، على التوالي و ك& # x3b5 = [R *] / [R] و & # x3b1K& # x3b5 = [LR *] / [LR] هي ثوابت التوازن لتنشيط المستقبلات الخالية من الترابط والرابط.

      يعتمد نموذج SABER الحالي على شكليات مماثلة ولكنها مختلفة إلى حد ما كما تم تلخيصها في الشكل 3.يفترض أن الارتباط يغير ميل المستقبل للتنشيط ، لكنه لا يأخذ في الاعتبار تقاربات ربط مختلفة لأشكال المستقبل النشط وغير النشط. كد يمثل متوسط ​​مجموعة الارتباط بالمطابقة النشطة وغير النشطة في كل حالة ، ويتم تحديده بواسطة المعادلة 7. الفعالية & # x3b5 يمثل جزء من المستقبلات المرتبطة بالرابطات النشطة (المعادلة 9) ، وفعالية مستقبلات خط الأساس المحددة بالمثل & # x3b5R0 يميز الجزء النشط من المستقبل الخالي من الترابط (المعادلة 11). أخيرًا ، يمكن تضخيم الإشارة المتولدة في المستقبل بعد وظيفة توصيل تتميز بمعامل الكسب & # x3b3 (المعادلة 12).

      هناك جانب آخر لربط المستقبلات يجب مراعاته. مع توفر عدد متزايد بسرعة من هياكل المستقبلات التفصيلية ، بما في ذلك العديد من GPCRs ، أصبح من الواضح بشكل متزايد أن معظم المستقبلات في تشكيلها النشط لها موقع ارتباط ليجند جزيء صغير مدفون بعمق في الداخل. في كثير من الحالات ، تم العثور على مواقع الربط ، خاصة مواقع تقويم العظام ، مدفونة بالكامل (على سبيل المثال ، M2 / 3 muscarinic ، & # x3b22 الأدرينالية ، سفينغوزين -1 فوسفات S1P ، سيروتونين 5-HT ، مستقبلات كيموكين CCR5 ، جلوتامات mGlu1 ، وغيرها) في البعض ، لا يتعرضون للمذيبات جزئياً (على سبيل المثال ، & # x3bc- مستقبلات الأفيون والعديد من فئة منشط الببتيد B GPCRs) (Manglik et al.، 2012 Lee et al.، 2015 Shonberg et al.، 2015 Lu and Wu، 2016). يتم تضمين مجموعة من الأمثلة ثلاثية الأبعاد التمثيلية للتوضيح: الشكل النشط منبه (الأدرينالين) المرتبط بـ & # x3b22- مستقبلات الأدرينالية (نوع A & # x3b1 GPCR) (Ring et al. ، 2013) (الشكل 5) ، ناهض (2MeSADP) ومضاد (AZD1283) من الأشكال المرتبطة بـ P2Y12 مستقبلات (نوع A & # x3b4 GPCR) (Zhang et al. ، 2014a Zhang et al. ، 2014b) (الشكل 6) ، ناهض (ديكساميثازون) ومضاد (ميفبريستون) أشكال مرتبطة بمستقبلات الجلوكوكورتيكويد (مستقبل نووي) ( Kauppi et al. ، 2003) (الشكل 7) ، وشكل ناهض (الغلوتامات) المرتبط بمستقبلات AMPA (قناة أيون مرتبطة بالرباط أو مستقبل مؤين للتأين) (Twomey et al. ، 2017) (الشكل 8). إن الحاجة إلى مواقع ربط مدفونة بالكامل ليست من قبيل الصدفة ، لأنها تسمح للرابط المرتبط بالتفاعل مع المستقبل على طول سطحه بالكامل ، بحيث يمكن للأحجام الصغيرة نسبيًا أن تركز تفاعلات متعددة (الرابطة الأيونية والقطبية والرابطية الهيدروجينية وغيرها) وتحقيق ما يكفي ارتباط قوي بكفاءة ترابط جيدة كافية [طاقة ربط لكل حجم وحدة (هوبكنز وآخرون ، 2004)]. يجب أن تتطور مواقع الارتباط هذه لجميع روابط الجزيئات الصغيرة الداخلية للسماح بفاعلية كافية. على هذا المنوال ، ليس من قبيل الصدفة أيضًا أن أهداف الأدوية التقليدية ، مثل GPCRs ، أو القنوات الأيونية ، أو الإنزيمات ، هي بالضبط تلك التي تحتوي على مثل هذه التجاويف أو الشقوق المحددة جيدًا لربط روابطها الطبيعية حيث يمكن أيضًا استغلالها لأغراض قابلية الدواء. (Bodor and Buchwald، 2012 Zhu et al.، 2012 Santos et al.، 2017). تتطلب القابلية للتهريب فاعلية كافية (بشكل عام ، قوة شبه مكروية ، على سبيل المثال ، EC50 & lt 1 & # x3bcM) مع أدوية الجزيئات الصغيرة الحالية بمتوسط ​​فعالية 20 نانومتر (Overington et al. ، 2006). هذا يعني الحاجة إلى طاقة ربط قوية بما فيه الكفاية (& # x394جي 0). يعد الافتقار إلى جيوب الربط المحددة جيدًا والتي تجعل التفاعلات القوية المحتملة على طول معظم سطح الترابط سببًا رئيسيًا وراء صعوبة تعديل الأهداف العلاجية الأخرى مثل تفاعلات البروتين والبروتين # x2013 (PPIs) بواسطة الجزيئات الصغيرة (Arkin) and Wells، 2004 Scott et al.، 2016 Bojadzic and Buchwald، 2018).

      الشكل 5 هيكل ثلاثي الأبعاد للناهض (الأدرينالين ، الأدرينالين) الشكل النشط المرتبط بـ & # x3b22- مستقبلات الأدرينالية (نوع A & # x3b1 GPCR). يظهر الهيكل [PDB ID 4LDO (Ring et al. ، 2013)] من منظورين مختلفين (واحد على اليمين هو 90 & # xb0 مستدير ومكبر إلى حد ما من الأعلى). المستقبل مغطى بسطح رمادي شبه شفاف وتشير بنية البروتين الثانوية إلى أن اللجند مظلل على أنه بنية CPK صلبة أغمق. يتلاشى الترابط إلى حد ما لأنه مدفون داخل المستقبل ويحجبه السطح شبه الشفاف المغطى ، ويهدف هذا إلى توضيح أن هذا الموضع لا يمكن الوصول إليه للربط المباشر من الخارج.

      الشكل 6 هيكل ثلاثي الأبعاد للناهض (2MeSADP أعلى) والمضاد (AZD1283 أسفل) الأشكال المرتبطة من البيورينرجيك P2Y12 مستقبل (نوع A & # x3b4 GPCR). تظهر الهياكل [PDB IDs 4PXZ و 4NTJ (Zhang et al. ، 2014a Zhang et al. ، 2014b)] مغطاة بسطح رمادي شبه شفاف ، كما أن بنية البروتين الثانوية المشار إليها مظللة على شكل تركيبات CPK صلبة داكنة. يتم عرض كلاهما من منظورين مختلفين ، حيث يكون المنظور الموجود على اليمين 90 & # xb0 عرضًا مستديرًا ومكبرًا إلى حد ما من الأعلى. تتلاشى الأربطة لأنها مدفونة داخل المستقبل وتحجبها أسطح التغطية ، ومع ذلك ، فإن المضاد (السفلي) يكون أقل دفنًا من الناهض (أعلى) بحيث لا يتم تغطية جزء من سطحه ويمكن الوصول إليه من الخارج كما هو موضح بواسطة ألوان أكثر إشراقًا حيثما تكون مرئية بشكل مباشر.

      الشكل 7 هيكل ثلاثي الأبعاد من ناهض- (ديكساميثازون يسار) ومضاد- (ميفيبريستون يمين) أشكال مرتبطة بمستقبلات الجلوكوكورتيكويد (مستقبل نووي). تظهر الهياكل [معرفات PDB 1P93 و 1NHZ (Kauppi وآخرون ، 2003)] من منظورين مختلفين (الجزء السفلي عبارة عن عرض مستدير 90 & # xb0 كما هو موضح بواسطة الأسهم). تظهر المستقبلات مغطاة بسطح رمادي شبه شفاف ، ويشير هيكل البروتين الثانوي إلى أن الروابط تم تمييزها على أنها هياكل CPK صلبة داكنة. تتلاشى الروابط لأنها مدفونة داخل المستقبلات وتحجبها أسطح التغطية ، ومع ذلك ، فإن المضاد (على اليمين) يكون أقل دفنًا من الناهض (يسار) بحيث لا يتم تغطية جزء من سطحه ويمكن الوصول إليه من الخارج كما هو موضح بواسطة ألوان أكثر إشراقًا حيثما تكون مرئية بشكل مباشر.

      الشكل 8 هيكل ثلاثي الأبعاد لشكل ناهض (غلوتامات) مرتبط بمستقبل AMPA (قناة أيون لبوابة يجند أو مستقبلات متجانسة). يظهر التركيب [PDB ID 1P93 (Twomey et al. ، 2017)] مع المستقبل الموضح مغطى بسطح رمادي شبه شفاف وبنية البروتين الثانوية المشار إليها يتم تمييز الروابط الترابطية على أنها هياكل CPK صلبة أغمق (يوضح الشكل الداخلي قسمًا حول الحد يجند كتضخم). كما كان من قبل ، فإن الترابطات تتلاشى لأنها مدفونة داخل المستقبلات وتحجبها أسطح التغطية.

      نظرًا لأن مجال ربط الترابط (LBD) لمعظم المستقبلات في شكلها النشط مدفون بالداخل ولا يمكن الوصول إليه من المذيب المحيط ، فإن الارتباط المباشر بالشكل النشط (الاختيار المطابق ، الملاءمة المختارة) هو احتمال غير محتمل للجزيء الصغير النموذجي الروابط (المميزة بعلامة X حمراء في الشكل 3). نظرًا لأن LBD لا يمكن الوصول إليه مباشرة من الخارج عندما يكون المستقبل في شكله النشط (R *) ، فمن غير المرجح أن ناهضات الجزيئات الصغيرة يمكنها ببساطة & # x201csnap & # x201d في مكانها وتثبيت هذا التشكل كما هو مطلوب من خلال الاختيار التوافقي آلية (الشكل 2). للسبب نفسه ، فإن افتراض ثابت ملزم منفصل للحالة النشطة (على سبيل المثال ، كد/& # x3b1 في الشكل 2) والحاجة إلى حلقة ديناميكية حرارية تبدو غير واقعية لمعظم روابط الجزيئات الصغيرة.

      إذا كانت هناك حاجة إلى موقع ربط مغلق بإحكام من أجل الربط والتفعيل الفعال ، فإن المطابقة النشطة تحتاج إلى LBD مغلق لا يمكن الوصول إليه مباشرة من الخارج. تم تضمين الآراء التمثيلية التي تُظهر منبهات مدفونة بالكامل (الشكلان 5 و # x20138) هنا لتسليط الضوء على ذلك. علاوة على ذلك ، يمكن أن يوفر هذا أيضًا آلية معقولة وإن كانت مبسطة للقدرة المتناقصة للمنبهات الجزئية على تحويل التوازن نحو الحالة النشطة (الشكل التكميلي S3). قد تعيق ناهضات أو مضادات جزئية إغلاق LBD المحكم (كما هو موضح في الشكل 6 أو الشكل 7) مما يقلل من فعاليتها في تنشيط المستقبل. يوفر نطاق & # x201cVenus flytrap & # x201d من الفئة C GPCR توضيحًا محتملًا لأنه يتقلب بين المطابقات المفتوحة والمغلقة مع ناهضات بشكل عام استقرار التشكل المغلق والخصوم الذين يحافظون على التشكل المفتوح (Geng et al. ، 2013 Koehl et al. ، 2019 ). في الكيمياء الطبية ، من المعروف جيدًا أن الناهضات والمضادات الجزئية تحافظ عادةً على بعض العناصر الهيكلية المهمة (العقاقير الصيدلانية) من الناهضات الكاملة مع دمج لبنات بناء إضافية في كثير من الأحيان مما يؤدي إلى تراكيب جزيئية أكبر. بعض الحالات المعروفة موضحة في الشكل التكميلي S1. يعتمد ارتباط المستقبلات على الحجم بدرجة جيدة ، ولا يمكن للروابط الصغيرة جدًا ولا الكبيرة جدًا أن تحقق أقوى ارتباط (أقل طاقة) (Buchwald ، 2008). الصورة العامة هي بالتأكيد أكثر تعقيدًا بكثير بالنسبة للمستقبلات المختلفة ، وهذا تبسيط للتطبيق المحدود. ومع ذلك ، فقد تم ذكره على أنه تصور مبسط ممكن يمكن أن يكون مفيدًا في بعض التطبيقات [& # x201c جميع النماذج خاطئة ، لكن بعضها مفيد & # x201d (Box، 1979)]. تم عرض الحالات التي تحفز فيها ناهضات كاملة على إغلاق مجال LBD بينما ترتبط ناهضات جزئية بتشكيل أكثر انفتاحًا ، على سبيل المثال ، لمستقبل AMPA (الشكل 8) (Jin et al. ، 2003 Twomey and Sobolevsky ، 2018). من ناحية أخرى ، يبدو أن المعلومات الهيكلية المستمدة من دراسات التبلور المشترك مع بعض GPCRs تشير إلى أن تنشيطها يتضمن ترجمة تغييرات هيكلية متواضعة نسبيًا داخل موقع ربط الترابط إلى تحولات توافقية واسعة النطاق في الجانب داخل الخلايا من المستقبل (Shonberg وآخرون ، 2014 Shonberg et al. ، 2015). في النهاية ، لا تحد هذه الافتراضات المتعلقة بآليات التنشيط والربط (الشكل 3 ، الشكل S3) من قابلية التطبيق العام لشكلية النموذج الحالي وأشكاله الكمية المقابلة (الشكل 1).

      ميزة مقابل نماذج المستقبلات الكمية الأخرى

      لا يتمتع الشكل الكمي لنموذج مستقبلات SABER العام الحالي (المعادلة 2 أو المعادلة 4) بجمال مذهل ناتج عن بساطة أنيقة ، ومع ذلك ، فإنه يتمتع بالعديد من الفوائد مقارنة بالنماذج الكمية المعقدة الأخرى التي تعتمد في الغالب على التشغيل (الأسود و Leff) النموذج (Black and Leff 1983 Black et al. ، 1985): 2

      تفترض معظم النماذج الدوائية الكمية الحالية وظائف المستقبلات على غرار هذه المعادلة القائمة على النموذج التشغيلي (Trzeciakowski، 1999a Ehlert et al.، 2011 Slack and Hall، 2012 Ehlert، 2015b Copeland، 2016 Hall and Giraldo، 2018) مع بعض الإضافات اللازمة النشاط التأسيسي (Jenkinson، 2010 Kenakin، 2017 Kenakin، 2018b) ، بما في ذلك التمديد مثل تلك التي قام بها Ehlert وزملاؤه (Ehlert et al. ، 2011) أو Hall and co-work (Slack and Hall، 2012 Hall and Giraldo، 2018 ). ومع ذلك ، هناك عيوب ملحوظة تعيق انتشار استخدام هذه كد و & # x3c4المعادلات المبنية على معظمها تم التغلب عليها بالنموذج الحالي. على الرغم من أن الأشكال العامة للنموذج ثلاثي المعلمات الحالي (المعادلة 4) ونموذج النموذج التشغيلي (المعادلة 20) متشابهة تمامًا (مع & # x3b5 & # x3b3 هنا لاستبدال & # x3c4 من النموذج التشغيلي ، بالإضافة إلى & # x3b5 الموجودة في المقام) ، توفر المعلمات الحالية العديد من المزايا & # x3c4النماذج المستندة. سيتم تسليط الضوء على هذه باختصار أدناه.

      مناسبة بشكل أفضل للتركيب عن طريق الانحدار غير الخطي

      يؤدي تحويل الشكل الكلاسيكي للنموذج التشغيلي (المعادلة 20) بطريقة مشابهة لتلك التي تم إجراؤها للنموذج الحالي (المعادلة 14 مقابل 13) إلى

      ومن ثم ، بالنسبة للنموذج التشغيلي ، فإن أقصى استجابة جزئية يمكن تحقيقها بواسطة يجند هي FResp، max = & # x3c4/(& # x3c4+1) ونشاط نصف الحد الأقصى يحدث في EC50 = كObs = كد/(1+& # x3c4). لأنه من أجل المنبهات الكاملة (أو القريبة من الكاملة) ، فإن الاستجابة القصوى (الجزئية) ، & # x3c4/(& # x3c4+1) ، يجب أن تكون قريبة من 1 ، & # x3c4 يحتاج إلى قيم كبيرة ، ويصعب الحصول عليها بطريقة محددة جيدًا ، مثل & # x3c4/(& # x3c4 + 1) الكسر لم يعد حساسًا للتغييرات في & # x3c4 عند الاقتراب من الوحدة. ومن ثم ، فإن الملاءمة عن طريق الانحدار غير الخطي يمكن أن يؤدي إلى حجم كبير وغير واضح & # x3c4 القيم ، مما يجعل الارتباط كد القيم أيضا محددة بشكل سيئ. منذ حساب كد يكون (& # x3c4 + 1) - أضعاف ما لوحظ كObs، يمكن أن ينتهي النموذج التشغيلي (المعادلة 20) ليس فقط بسوء التحديد ، ولكن أيضًا غير واقعي كد القيم التي لا معنى لها أساسًا من منظور ملزم. ومن ثم ، يصعب ملاءمة هذا النموذج مع ناهضات كاملة أو قريبة من ناهضات كاملة ، ويمكن أن تكون النتائج مرهقة لتفسيرها (انظر ، على سبيل المثال ، الجدول 1 والشكل A1 في Buchwald ، 2017 للحصول على رسوم توضيحية محددة). بالاتفاق مع هذا ، أظهر تحليل التعرّف الرياضي والمحاكاة للنموذج التشغيلي أنه عندما تتوفر بيانات الفحص الوظيفي فقط ، فإن معامل التحويل فقط (& # x3c4/كد) و لا & # x3c4 يمكن تقديرها بدقة (Zhu et al. ، 2018). هناك بالفعل تطبيقات تستخدم النموذج التشغيلي إما فقط لتحديد عدم حلها & # x3c4/كد النسب (Kenakin وآخرون ، 2012) أو مع التجريبية كد قيم لتقييد الانحدار (Rajagopal et al. ، 2011). لأنه في النموذج الحالي ، & # x3b5 يقتصر على النطاق من 0 إلى 1 و كد مستقل عن & # x3b5، لا يواجه الملاءمة بواسطة الانحدار غير الخطي هذه المشكلات ، ويمكن تركيب جميع المعلمات بطريقة محددة جيدًا للناهضات الجزئية والكاملة طالما كانت هناك نقاط بيانات كافية. تم تضمين العديد من الأمثلة المحددة في الفصل التالي للتوضيح.

      أكثر حدسية Parametrization

      كما هو موضح في المعادلة 21 ، فإن كد معلمة النموذج التشغيلي التي تم الحصول عليها من تركيب البيانات تختلف عن الظاهر (المرصود) كObs حيث تعتمد قيمته أيضًا على & # x3c4: كObs = كد/(& # x3c4+1). على الرغم من أن هذا يسمح لمنحنى التركيز & # x2013response بالانتقال من منحنى التركيز & # x2013binding ، ولهذا السبب هناك حاجة إلى مثل هذه النماذج المعقدة في المقام الأول ، إلا أنه يجعل أيضًا كد معلمة تجريبية لا تتعلق مباشرة بالربط. كما نوقش أعلاه ، لمنبهات كاملة أو قريبة من الكاملة ، & # x3c4 يجب أن يكون كبيرًا [على سبيل المثال ، & # x3c4& GT10 مطلوب ل هالأعلى = & # x3c4/(& # x3c4+1) & gt0.9] و كObs سيتم تحويل القيم إلى حد كبير مقارنة بـ كد& # x2014 في كثير من الأحيان إلى قيم عالية غير واقعية والتي تكون بعيدة بوضوح عن تقارب الربط الفعلي للرابط. ومن ثم ، فقد أصبح مقبولاً للاستخدام كد كمعامل تجريبي لا يتعلق بالضرورة بربط المستقبلات ، وفي بعض التطبيقات ، مثل GraphPad Prism ، لا يتم تركيب ناهضات كاملة على الإطلاق مع هذا النموذج. تمت الإشارة إلى أنه بالنسبة للنموذج التشغيلي ، فإن التغييرات في ملزمة (كد) وفي التشكل (& # x3c4) يتعذر تمييزها عن ناهضات فعالة جدًا تجعل التفسيرات صعبة ومرهقة (Colquhoun ، 1998).

      على عكس ذلك ، فإن جميع معلمات النموذج الحالي واضحة ومباشرة وبديهية ومرتبطة بوضوح بعملياتها المقابلة. يتميز التقارب (الربط) بـ كد، ثابت الربط ، والقيم المقاسة في فحوصات التوازن يمكن استخدامها مباشرة في النموذج. هذه كد ينفصل عن قدرة ما بعد الارتباط لتنشيط المستقبل (الفعالية) بالإضافة إلى قوة تضخيم ما بعد التنشيط. تتميز الفعالية (القدرة على تنشيط المستقبل) بـ & # x3b5، معلمة بدون وحدة خاصة بالرابط تتراوح من 0 (للرابط الذي يحافظ على جميع المستقبلات غير نشطة) إلى 1 (لمنبه يحول جميع المستقبلات إلى الحالة النشطة). يتميز التنبيغ اللاخطي ، بسبب التضخيم اللاحق للمستقبلات (الكسب) ، بـ & # x3b3، معلمة بدون وحدة تتراوح من 1 (بدون تضخيم) إلى ما لا نهاية.

      يتم فصل تنشيط المستقبلات وتضخيم الإشارة

      يتغلب النموذج الحالي أيضًا على مشكلة أساسية متعلقة بالفرضية للنموذج التشغيلي (Black and Leff) و del Castillo & # x2013Katz ، أي أنه على الرغم من أن المعادلات النهائية متطابقة رياضياً (المعادلة 20) ، إلا أنها تصل إليها من مقاربتين مختلفتين من الناحية المفاهيمية كلاهما غير مكتمل. من ناحية ، فإن نموذج الحد الأدنى من الحالتين (del Castillo & # x2013Katz) (الشكل 2 بدون حالة R *) ، والذي يعد الآن نهجًا مقبولًا بشكل عام لوصف تبديل المستقبل بين الحالات النشطة وغير النشطة ، لا يتضمن الإشارة رسميًا التضخيم (النقل غير الخطي) ، والذي ، كما تمت مناقشته ، معروف بوجوده. من ناحية أخرى ، يسمح النموذج التشغيلي (Black and Leff) بالاستجابة غير الخطية ، ولكنه نموذج أحادي الحالة لا يتضمن رسميًا الوجود المحتمل لحالات مستقبلات مرتبطة بالرابطات النشطة وغير النشطة (أي احتمال عدم احتلال الجميع مستقبلات نشطة) ، وهو معروف أيضًا بوجوده. وهو يعوض عن ذلك من خلال قصر وظيفة الإخراج الخاصة به على الحد الأقصى & # x3c4/(& # x3c4+1). وبالتالي ، فإن هذه النماذج ، في الواقع ، تدمج معًا تأثيرين مختلفين في كل منهما & # x3c4 المعلمة: & # x201cintrinsic efficacy & # x201d للرابط (المرتبط) لتنشيط المستقبل ، والذي يمكن أن يؤدي إلى تنشيط جزئي (ناهض جزئي) حتى مع وظيفة الاستجابة الخطية ، و & # x201cefficacy & # x201d لتضخيم ما بعد التنشيط المصب من المستقبل ، والذي يمكن أن يخلق استجابة جزئية تزيد عن الشغل الجزئي (& # x201creceptor reserve & # x201d) ويمكن أن تكون خاصة بالأنسجة أو الأعضاء. يتم التغلب على هذه المشكلات من خلال النموذج الحالي ، من خلال إدخال فعالية منفصلة & # x3b5 وكسب & # x3b3 المعلمات المنفصلة أيضًا عن تقارب الربط ، كد.

      إمكانية الاختزال إلى النماذج السابقة و / أو المبسطة

      أخيرًا ، هناك ميزة مهمة أخرى وهي أنه ، على عكس النماذج السابقة ، فإن النموذج الحالي هو نموذج معمم حقيقي: يمكن استرداد النماذج المبسطة كحالات خاصة لمعلماتها ، على سبيل المثال ، & # x3b5R0 = 0 لعدم وجود نشاط تأسيسي ، & # x3b3 = 1 لعدم التضخيم (لا يوجد احتياطي للمستقبلات) ، و & # x3b5 = 1 للاندفاع الكامل فقط (الشكل 1). عندما تكون كافية و / أو عندما لا توجد بيانات كافية لدعم المعلمات الكاملة ، يمكن ويجب استخدام هذه النماذج المبسطة بمفردها. لا يمكن اختزال النموذج التشغيلي ، وبالتالي جميع امتداداته ، إلى أشكال أبسط ، مثل هالأعلى نموذج للاندفاع الجزئي أو معادلة كلارك ، حيث لا يوجد & # x3c4 القيم التي يتم تحويل المعادلة 20 لها مرة أخرى إلى أي منها (انظر Buchwald ، 2017 للحصول على التفاصيل). لذلك ، لا يمكن للمرء العودة إلى أشكال أبسط على الرغم من كونه مرغوبًا بشكل عام للنماذج المعقدة لتكون قادرة على استعادة النماذج الأبسط للحالات الخاصة لمعلماتها. في المقابل ، يمكن تقليص النموذج العام الحالي إلى سلسلة كاملة من الأشكال الأبسط المتداخلة على التوالي (الشكل 1). على سبيل المثال، & # x3b5R0 = 0 يشير إلى عدم وجود نشاط تأسيسي ، ويقلل من النموذج العام المكون من أربع معلمات (الشكل 1 أ) إلى نموذج المعلمات الثلاثة المستخدم من قبل (الشكل 1 ج). علاوة على ذلك ، إذا لم يكن هناك تضخيم لاحق للمستقبلات ، & # x3b3 = 1 ، ينهار هذا النموذج (الشكل 1 ج) مرة أخرى إلى ملف هالأعلى نموذج للمنبهات الجزئية بكفاءة & # x3b5 (الشكل 1 د):

      & # xa0 & # xa0 & # xa0 & # xa0 (22)

      أخيرًا ، إذا تم اعتبار ناهضات كاملة فقط (& # x3b5 = 1) ، جميع المستقبلات المشغولة نشطة (الشكل 1F) ، وتنهار المعادلة المقابلة مرة أخرى إلى معادلة كلارك المعروفة ، والتي تشكل أساس نظرية المستقبلات الكمية بأكملها:

      & # xa0 & # xa0 & # xa0 & # xa0 (24)


      شاهد الفيديو: المستقبلات المجردة من الفعالية الذاتية (أغسطس 2022).