معلومة

ما هي تركيبة المحلول المعياري المخفف القياسي في مجموعة الليبتين ELISA؟

ما هي تركيبة المحلول المعياري المخفف القياسي في مجموعة الليبتين ELISA؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أحاول العثور على تركيبة المخزن المؤقت المخفف المستخدم لتخفيف مخزون اللبتين البشري لاستخدامه في اختبار ELISA. تشير الجهة المصنعة للمجموعة (https://www.thermofisher.com/elisa/product/Leptin-Human-ELISA-Kit/KAC2281) فقط إلى أن المخزن المؤقت يحتوي على 8 ملي مولار من أزيد الصوديوم ، لكن لا يمكنني العثور على التركيب الدقيق لـ المخزن المؤقت في أي مكان على الإنترنت.


وسط استنبات المايلوما والورم الهجين (يحتوي على مصل)

وسط نمو الورم الهجين مع هيبوكسانثين وثيميدين (يحتوي على مصل)


ما هي تركيبة المحلول المعياري المخفف القياسي في مجموعة الليبتين ELISA؟ - مادة الاحياء

نتائج الشد والتعافي

نتائج الخطية

ملاحظات طلب التقديم

  • صفيحة ميكروسكوبية 96-بئر مطلية مسبقًا
  • غسل العازلة
  • وقف الحل
  • مخفف (ق) الفحص
  • معيار المجففة بالتبريد
  • الجسم المضاد للكشف عن البيوتينيلات
  • ستربتافيدين- مقترن HRP
  • الركيزة خطوة واحدة TMB
  • ماء مقطر أو منزوع الأيونات
  • ماصات دقيقة لتوصيل أحجام 2 ومايكرول إلى 1 ومايكرول
  • ماصات 1-25 قابلة للضبط وماكرول لتحضير الكاشف
  • اسطوانات متدرجة سعة 100 وماكرول و 1 لتر
  • أنابيب لتحضير التخفيفات المعيارية والعينة
  • ورق ماص
  • قارئ صفيحة ميكروسكوبية قادر على قياس الامتصاصية عند 450 نانومتر
  • ورق رسم بياني أو كمبيوتر وبرمجيات لتحليل بيانات ELISA
  1. تحضير جميع الكواشف والعينات والمعايير كما هو موضح في الدليل.
  2. أضف 100 ومايكرول من المعيار أو العينة لكل بئر.
  3. احتضان 2.5 ساعة في RT أو O / N عند 4 درجة مئوية.
  4. أضف 100 وميكرول من الجسم المضاد للبيوتين المحضر إلى كل بئر.
  5. احتضان 1 ساعة في الرايت
  6. أضف 100 وميكرول من محلول ستربتافيدين المحضر لكل بئر.
  7. احتضان 45 دقيقة في الرايت
  8. أضف 100 وماكرول من TMB خطوة واحدة كاشف الركيزة إلى كل بئر.
  9. احتضان 30 دقيقة في الرايت
  10. أضف 50 ميكرول من محلول الإيقاف لكل بئر.
  11. اقرأ على الفور عند 450 نانومتر.

هل تحتاج إلى نتائج أسرع؟ جرب منصة SpeedELISA من RayBiotech للكشف الكمي في ثلاث ساعات فقط.


مجموعة ELISA لـ Leptin (LEP)

  • رقم المنتج. SEA084Eq
  • أنواع الكائنات الحية إيكوس كابالوس فرسي (حصان) نفس الاسم ، أنواع مختلفة.

النوعية

يحتوي هذا الاختبار على حساسية عالية وخصوصية ممتازة للكشف عن Leptin (LEP).
لم يلاحظ أي تفاعل متقاطع أو تداخل كبير بين Leptin (LEP) ونظائره.

استعادة

تم زيادة المصفوفات المدرجة أدناه بمستوى معين من Leptin المؤتلف (LEP) وتم حساب معدلات الاسترداد من خلال مقارنة القيمة المقاسة بالكمية المتوقعة من Leptin (LEP) في العينات.

مصفوفة نطاق الاسترداد (٪) متوسط(٪)
مصل (ن = 5) 88-105 95
EDTA بلازما (ن = 5) 86-95 92
بلازما الهيبارين (ن = 5) 78-101 95

دقة

دقة الفحص الداخلي (الدقة داخل الفحص): تم اختبار 3 عينات ذات مستوى منخفض ومتوسط ​​وعالي من Leptin (LEP) 20 مرة على لوح واحد ، على التوالي.
دقة الفحص الداخلي (الدقة بين المقايسات): تم اختبار 3 عينات ذات مستوى منخفض ومتوسط ​​وعالي من Leptin (LEP) على 3 ألواح مختلفة ، و 8 مكررات في كل لوحة.
السيرة الذاتية (٪) = SD / متوسط ​​X100
الفحص الداخلي: السيرة الذاتية

هدايا

خدمات زيادة

  • الكواشف أحادية المكون لمجموعة الفحص
  • محلول تحلل خاص بـ ELISA / CLIA
  • مراقبة جودة ELISA / CLIA
  • خدمة ELISA Kit المخصصة
  • نموذج المرض الخدمة المخصصة
  • خدمة الأمصال المخصصة
  • كاشف تنشيط TGFB1
  • الخدمة التجريبية في الوقت الحقيقي PCR
  • ستربتافيدين

منع المخازن المؤقتة

يعد الحظر خطوة حاسمة بالنسبة لـ ELISAs وهناك عدد من الخيارات المتاحة. يؤدي اختيار المخزن المؤقت الصحيح للحظر إلى زيادة الحساسية عن طريق تقليل الربط غير المحدد وضوضاء الخلفية.

Block Ace (BUF029)

أعلى من 1٪ BSA ، Block Ace عبارة عن مخزن مؤقت مانع عالي الأداء يمكن استخدامه أيضًا كمخزن للغسيل ولتخفيف الأجسام المضادة. بالمقارنة مع BSA ، توفر Block Ace خلفيات منخفضة ومنحنيات قياسية أكثر حدة.

كتلة BSA (BUF032)

قلل الارتباط غير المحدد في الساندويتش و ELISAs المستضد باستخدام BSA Block. استنادًا إلى BSA ، يحتوي هذا المخزن المؤقت على مثبت بروتين خاص يخلق بيئة مستقرة طويلة الأجل لطلاء المستضدات أو التقاط الأجسام المضادة.

Ultrablock (BUF033)

مخزن مؤقت يحتوي على بروتينات غير ثديية مسجلة الملكية من الأسماك مصممة لتقليل الارتباط غير النوعي. مع قوة الحجب الإضافية ، فهي مناسبة للاستخدام في مقاومة المستضد السفلية والساندويتش ELISAs ذات الخلفية العالية وعند العمل مع عينات مصل الإنسان والأبقار والخنازير. يمكن أن يغطي Ultrablock مواقع الربط غير المحددة التي يتعذر الوصول إليها بطريقة معقمة بواسطة الحاصرات التقليدية.

Synblock (BUF034)

للحصول على أقصى قوة للحظر ، استخدم Synblock ، وهو عبارة عن تركيبة جديدة غير بروتينية لحجب ELISA المغلف بالأجسام المضادة والساندويتش. يوفر عامل الحجب الخامل التخليقي هذا الحد الأقصى من التداخل ويزيل ضوضاء الخلفية غير المحددة.


مشاركات المدونة

نستخدم عادةً مثبتًا للألواح المطلية مسبقًا. تم تصميم خطوة الغسيل الإضافية لإزالة هذه المكونات قبل بدء الفحص. إذا لم تقم بإجراء الغسيل ، فإن التأثير على أداء الفحص يكون ضئيلًا.

ما هي استنساخ الأجسام المضادة المستخدمة في مجموعات ELISA الخاصة بك؟

المعلومات المتعلقة باستنساخ الأجسام المضادة المستخدمة في مجموعاتنا هي ملكية خاصة. ومع ذلك ، يمكن توفير الاستنساخ (متعدد النسيلة أو وحيدة النسيلة) والأنواع المضيفة للأجسام المضادة عند الطلب.

هل يجب علي استخدام عينات المصل أو البلازما لتجربة ELISA الخاصة بي؟

هذا يعتمد على الأهداف التي تقوم بتحليلها وخصائص دراستك. من الناحية المثالية ، ننصح بتحديد الفرق بين المصل والبلازما للأهداف ذات الاهتمام وتحديد نوع العينة التي سيتم استخدامها للتقدير الكمي. اعتمادًا على الأهداف ، قد يكون هناك اختلاف في تركيزات الأهداف بين المصل والبلازما. أهم عامل في تحضير عينات البلازما أو المصل هو الاتساق في التحضير لضمان دقة القياسات. بشكل عام ، يجب أن تكون عينات البلازما / المصل خالية من الجسيمات ، ولا تحتوي على دهون زائدة ، ولا تحتوي على انحلال دم.

ستساهم هذه الأنواع من الملوثات في الخلفية ، وتؤثر سلبًا على دقة الفحص. المفتاح هو تحضير العينة بنفس الطريقة في كل مرة. أي ، عينات الطرد المركزي بنفس السرعة ، وفي نفس الوقت ، وإزالة المصل أو البلازما مباشرة بعد الطرد المركزي وقسمة العينات وتجميدها في نفس الوقت. تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة.

قد تحتوي عيّنتي على مستويات منخفضة جدًا من المادة التحليلية. ما الطرق التي يمكنني استخدامها لتحسين الاكتشاف؟

بالنسبة إلى تنسيقات LEGEND MAX & trade و ELISA MAX & trade Deluxe ، نوصي باتباع البروتوكول المقدم. لا يمكننا ضمان أداء المجموعة في حالة وجود انحرافات عن البروتوكول. فيما يلي اقتراحات عامة إذا كنت تستخدم تنسيق ELISA MAX الخاص بنا والمعيار التجاري:

  • تحكم في ضوضاء الخلفية عن طريق زيادة عدد مرات الغسيل ووقت النقع بين الغسلات.
  • دقة فحص التحكم. على سبيل المثال ، كن أكثر حرصًا واتساقًا في سحب العينة ، واستخدم المناشف الورقية الجديدة للتنصت على الأطباق لتجنب تلوث avidin-HRP وزيادة أحجام الغسيل.
  • زيادة أوقات الحضانة. يجب أن تدرك أن هذا عادة ما يؤدي أيضًا إلى زيادة الخلفية ، لذلك قد لا تزيد حساسية الفحص بالضرورة.
  • ركز عينتك ، إن أمكن.
  • استخدم طريقة ملائمة منحنى لوجستي مكون من خمس معلمات لحساب تركيز العينة بدقة أكبر في الطرف السفلي من المنحنى القياسي.

في كثير من الحالات ، قد تحتوي العينة ببساطة على مستويات منخفضة جدًا إلى مستويات غير قابلة للاكتشاف من المادة التحليلية. بغض النظر عن كيفية تلاعبك بالمقايسة ، فقد لا تزال غير قادر على الحصول على تركيزات يمكن اكتشافها.

نفدنا من الأجسام المضادة للالتقاط / الكشف في مجموعة ELISA الخاصة بنا. هل يمكننا استخدام جسم مضاد منفرد / مستقل لاستبداله؟

لا ، لا نوصي باستخدام الكواشف المستقلة لاستبدال مكونات المجموعة ولا يمكننا ضمان أداء المجموعة إذا قمت باستبدال أو دمج الكواشف من مجموعات / جهات تصنيع مختلفة.

كم عدد العينات التي يمكنني تشغيلها باستخدام مجموعة أدواتك؟

سيعتمد هذا على ما إذا كان سيتم تحليل عيناتك في نسختين أو ثلاث نسخ. على سبيل المثال ، بعد إضافة المعايير ، يمكنك تشغيل 80 عينة بدون نسخ مكررة أو 40 عينة مكررة وهكذا.

كيف يجب تخزين الألواح بعد الطلاء؟

إذا لم يكن بالإمكان استخدام الألواح المطلية على الفور ، فيجب إحكام غلقها وتخزينها طوال الليل عند 4 درجة مئوية.

لدي العديد من مجموعات LEGEND MAX ™ ELISA التي أريد تشغيلها في وقت واحد. هل يمكنني استخدام نفس مخزن الغسيل لجميع المجموعات؟

المخزن المؤقت للغسيل المقدم في جميع مجموعات LEGEND MAX والتداول لدينا هو نفسه ويجب أن تكون أرقام الأجزاء الموجودة على زجاجات الغسيل العازلة في هذه المجموعات متطابقة. بالنسبة لـ ELISA MAX & trade Deluxe و ELISA MAX & trade Standard Sets ، نقدم وصفة لمخزن الغسيل في كل مجموعة وورقة بيانات فنية rsquos. هذه الوصفة هي نفسها لجميع ELISA MAX ومجموعات التجارة.

أنا أستخدم تنسيقات البيوتين والمنقى لنفس استنساخ الجسم المضاد لمحاولة إعداد ELISA الخاص بي ، لكني لم أحقق أي نجاح.

إذا كنت تستخدم نفس الاستنساخ لكل من الكشف عن الأجسام المضادة والتقاطها ، فقد يكون الحاتمة مشغولة بالفعل بأحد الأجسام المضادة وتمنع الارتباط بالآخر. نوصي باختيار نسخ مختلفة من أجل التقاط الأجسام المضادة واكتشافها.

أين يمكنني العثور على تلميحات حول استكشاف الأخطاء وإصلاحها لفحوصات ELISA؟

متى يجب أن أستخدم أطقم LEGEND MAX ™ ELISA ذات الألواح المطلية مسبقًا؟

LEGEND MAX & trade Kits جاهزة للاستخدام ، ومصممة لسهولة الاستخدام وتقليل متطلبات طلاء ألواح ELISA وإعداد التخفيفات العازلة. نوصي بـ LEGEND MAX & Trade Kits للمستخدمين الجدد في ELISAs.

ما نوع عازلة الطلاء التي يجب أن أستخدمها مع ELISA الخاص بي؟

بشكل عام ، نوصي باستخدام PBS (درجة الحموضة 7.4) أو عازلة كربونات (درجة الحموضة 9.5). قد يعتمد عازل الطلاء الدقيق الذي تختاره على اكتشاف السيتوكين.

لماذا نوصي بعدم استخدام azide في مخازن ELISA المؤقتة؟

أزيد مثبط لا رجعة فيه لـ HRP.

ما هي حساسية مجموعات ELISA الخاصة بك؟

إذا كنت تستخدم تنسيق LEGEND MAX & trade أو ELISA MAX & trade Deluxe ، فيرجى الرجوع إلى دليل المجموعة الفردية و rsquos لمزيد من المعلومات حول الحساسية. لا نقدم هذه المعلومات لـ ELISA MAX & trade Standard Sets ولكن نظريًا ، يجب أن تتطابق مع تنسيق ELISA MAX & trade Deluxe إذا كنت تستخدم جميع كواشف BioLegend & rsquos.

ما هو العمر الافتراضي لمنتجات BioLegend ELISA؟

BioLegend & # 39s LEGEND MAX & trade Kits مضمونة لمدة 3 أشهر من تاريخ الاستلام. ELISA MAX & trade Sets مضمونة لمدة 12 شهرًا من تاريخ الاستلام. للحصول على تاريخ انتهاء صلاحية خاص بالدفعة ، راجع ملصق الصندوق الموجود على كل منتج.

هل يمكنني استخدام معيار المؤتلف المزود مع المجموعة للمقايسة الحيوية؟

لا ، لا نوصي باستخدام معيار البروتين المؤتلف لأي تطبيقات أخرى. تمت معايرة معايير البروتين المدرجة في المجموعة لاستخدامها كمعيار ELISA ولم يتم اختبارها من أجل النشاط الحيوي. بالإضافة إلى ذلك ، قد تحتوي معايير بروتين ELISA على بروتينات حاملة أخرى ولم تخضع لنفس اختبار العقم مثل البروتينات المؤتلفة النشطة بيولوجيًا.

هل يمكنني استخدام لوحات معقمة من درجة زراعة الأنسجة من أجل ELISA؟

لا ، فقد تم تصميم لوحات زراعة الأنسجة لأغراض زراعة الخلايا ولا تتمتع عادةً بقدرة عالية على الارتباط بالبروتين. بالنسبة إلى ELISA ، نوصي باستخدام ألواح عالية الارتباط بالبروتين مثل Nunc Maxisorp وألواح التجارة (Cat. رقم 423501).

هل يمكنني استخدام الجسم المضاد للالتقاط والكشف المقدم كجزء من مجموعة ELISA لتطبيقات أخرى مثل تلطيخ التدفق الخلوي؟

تم التحقق من صحة الأجسام المضادة المستخدمة في مجموعات ELISA الخاصة بنا لاستخدامها في فحوصات ELISA ولا يمكننا ضمان أنها ستعمل في تطبيقات أخرى ، مثل قياس التدفق الخلوي. بدلاً من ذلك ، نوصيك باستخدام الأجسام المضادة التي تم التحقق من صحتها باستخدام قياس التدفق الخلوي لهذه التجارب.

هل يمكنني استخدام مجموعات ELISA الخاصة بك لعينات الأنسجة الخاصة بي؟

بشكل عام ، يمكن استخدام منتجات BioLegend & rsquos ELISA للأنسجة أو مستخلصات الخلايا / المتجانسات طالما تم تحضير العينات بطريقة تتوافق مع نشاط المناعة. لهذا ، نوصي باستخدام الإرشادات التالية:

  • يجب تحلل الأنسجة / الخلايا أو تجانسها في محلول محايد للأس الهيدروجيني لا يحتوي على مواد كيميائية تغير طبيعة (مثل اليوريا ، الثيوريا ، SDS).
  • لا توجد مستويات أو أدنى مستويات للمنظفات (مثل SDS و Triton و trade X-100).
  • لا توجد قوة أيونية مفرطة (تركيز الملح أكبر من القوة الأيونية الفسيولوجية).
  • يجب أن تحتوي المخازن المؤقتة على كوكتيلات مثبطة للبروتياز كافية للحفاظ على البروتينات المستهدفة من التحلل البروتيني بواسطة الإنزيمات المنبعثة من الخلايا.

لا نوصي بإعادة استخدام العينات. للحصول على نتائج دقيقة ، يجب تقسيم العينات وتخزينها للاستخدام مرة واحدة فقط. إذا قررت إعادة استخدام عينة ، فستحتاج إلى إجراء تجارب تحقق إضافية للتأكد من قدرتك على الحصول على قراءات دقيقة. سيتأثر هذا بعدد من العوامل بما في ذلك استقرار العينة.

هل يمكنني استخدام أزواج الأجسام المضادة ELISA المتطابقة مع معيار بروتين من شركة أخرى؟

إذا تم توفير الأجسام المضادة كجزء من مجموعة ، فإننا لا نوصي بدمج الكواشف من مجموعات ELISA المختلفة. لا يمكننا ضمان أداء المجموعة إذا قمت بدمج الكواشف من مجموعات متعددة أو الشركات المصنعة. إذا كنت قد اشتريت أجسامًا مضادة فردية وقمت بتطوير ELISA الخاص بك ، فقد يكون ذلك ممكنًا ولكن يجب اختباره. قد لا تتعرف الأجسام المضادة أو تظهر ارتباطًا ضعيفًا تجاه معيار البروتين إذا كان العامل المناعي المستخدم لتوليد تلك الأجسام المضادة مختلفًا عن معيار البروتين من حيث التسلسل أو التركيب.

في أي خطوة يمكنني تأخير إجراء ELISA الخاص بي لبضعة أيام؟ هل يمكنني تجميد لوحاتي لاستخدامها لاحقًا؟

من الأفضل اتباع البروتوكول الموصى به دون أي تأخير إضافي. ومع ذلك ، إذا كنت ترغب في إيقاف التجربة مؤقتًا ، فإننا نوصي بتأخير الإجراء في خطوة المنع (بعد الطلاء بجسم مضاد الالتقاط). يمكنك إضافة 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للحظر في الآبار والاحتفاظ باللوحات طوال الليل عند 4 درجة مئوية (الحد الأدنى من فقدان الإشارة أو عدم فقدانها) أو تجميدها عند -20 درجة مئوية لبضعة أيام (قد يكون لها بعض التأثير على الإشارة). لا ينصح بتأخير الإجراء في الخطوة الأولى (الطلاء بجسم مضاد للالتقاط بعد 16-20 ساعة عند 4 درجة مئوية) لأنه قد يؤدي إلى خلفية عالية.

نفدت بعض مكونات مجموعة ELISA ، هل يمكنني شراؤها بشكل منفصل؟

قد يكون من الممكن شراء بعض مكونات المجموعة بشكل فردي. يرجى الاتصال بمجموعة الخدمات الفنية الخاصة بنا وتقديم معلومات عن المجموعة ومكوناتها لتحديد ما إذا كان ذلك ممكنًا أم لا.

هل يمكنني مزج الكواشف من مجموعات ELISA MAX ™ مختلفة أو استخدامها في تطبيقات أخرى؟

لا ينصح بهذا. تم تحسين كواشف ELISA MAX والتجارة لقطعة معينة ، ولم يتم اختبار جودتها لتطبيقات أخرى غير ELISA.

هل يمكن إجراء الطلاء بجسم مضاد للالتقاط لفترة أطول من ليلة وضحاها؟

بشكل عام ، يوصى بالطلاء لمدة 16-20 ساعة عند 4 درجة مئوية. قد يؤدي وقت الحضانة الأطول إلى زيادة كمية الجسم المضاد الملتصق باللوحات وقد يؤدي ذلك إلى زيادة ضوضاء الخلفية.

هل يمكنني إضافة معيار إضافي عند الطرف الأعلى من المنحنى القياسي من أجل حساب التركيز الأعلى للتحليل؟

لا نوصي بهذه الممارسة. تعتمد حساسية المجموعة على المكونات الفردية والتحقق الجماعي من صحتها كمجموعة ولن تتغير بإضافة نقاط إضافية إلى المنحنى القياسي.

هل يمكنني إضافة معيار إضافي في الطرف السفلي من المنحنى القياسي لتعزيز حساسية الفحص الخاص بي؟

في حين أن هذا قد يكون ممكنًا ، فقد ينتهي بك الأمر مع هضبة إشارة بتركيزات أعلى من المعيار. يوصى عمومًا باستخدام نطاق التركيز الموصى به في دليل المستخدم.

هل يتداخل أحمر الفينول في الوسط مع اختبار ELISA؟

لا ، لن يتداخل لون الفينول الأحمر في وسائط زراعة الخلايا مع قراءات اختبار ELISA.

بالنسبة لبعض مجموعات ELISA الخاصة بك ، لماذا تتطلب عينات المصل الخاصة بي التخفيف باستخدام محلول الفحص؟

في بعض الحالات ، يكون التخفيف مع المخزن المؤقت للمقايسة مطلوبًا لتقليل فرق المصفوفة بين العينات والمعايير لتحقيق دقة أفضل.

كيف يمكنني الحصول على إشارة وحساسية أفضل لمقايسة ELISA الخاصة بي؟

& bull زيادة أوقات الحضانة (مع العينات ، أو الكشف عن الأجسام المضادة ، أو ركيزة أفيدين- HRP أو TMB). يرجى ملاحظة أن هذا قد يؤدي أيضًا إلى زيادة الخلفية في الفحص الخاص بك وقد لا يزيد الحساسية.
& هز الثور لوحات أثناء خطوات الحضانة.
& bull تأكد من إعادة تشكيل المعيار تمامًا قبل الاستخدام.
& bull زيادة الغسل والنقع بين الغسلات لتقليل الخلفية.
& bull إذا أمكن ، اقرأ اللوحة عند 450-570 (أو أقرب) نانومتر لطرح الخلفية.
& bull تحسين CV٪ المكررة من خلال التحكم في خطأ الماصات أو الغسل بكمية أكبر من المخزن المؤقت للغسيل.
& bull استخدم طريقة ملائمة منحنى 5-PL أو 4-PL ، بدلاً من تركيب منحنى خطي. يتم إجراء ذلك عادةً باستخدام برنامج ملائم للمنحنى ويوفر حسابًا أفضل عند الطرف السفلي من المنحنى.

ما هو الفرق بين مجموعات ومجموعات ELISA الخاصة بك؟

الاختلافات الأساسية بين هذه المجموعات هي الكواشف المضمنة في المجموعة أو المجموعة.

LEGEND MAX والتجارة: أطقم تم التحقق من صحتها بالكامل وجاهزة للاستخدام. أنها تحتوي على جميع الكواشف المطلوبة ، بما في ذلك لوحة شريطية 96 جيدا مغلفة مسبقا مع القبض على الجسم المضاد.

RAPID MAX والتجارة: خفض وقت الفحص إلى أقل من 90 دقيقة. تم التحقق من صحة كل مجموعة بشكل كامل وتحتوي على لوحة شريطية بها 96 بئر والتي تم تغطيتها مسبقًا لشل حركة الجسم المضاد الذي تم التقاطه.

ELISA MAX & trade Deluxe: خيار أكثر فعالية من حيث التكلفة يتضمن معظم المخازن المؤقتة والأجسام المضادة المعايرة مسبقًا والمعيار المؤتلف والركيزة. لا يتم تضمين اللوحات في هذه المجموعة ويجب شراؤها بشكل منفصل.

ELISA MAX & trade Standard: توفر المكونات الأساسية لإكمال ELISA بما في ذلك معيار البروتين المؤتلف ، والتقاط الأجسام المضادة واكتشافها ، و Avidin-HRP. تتطلب هذه المجموعة بعض التحسين وهي مثالية لأولئك الذين يرغبون في زيادة ميزانيتهم ​​من خلال توفير المخازن واللوحات الخاصة بهم.

هل تأتي مجموعات ELISA MAX ™ Deluxe مع لوحات؟

لا ، لا تأتي مجموعات ELISA MAX & trade Deluxe مع لوحات. يتم تضمين المخزن المؤقت للطلاء والمقايسة المخفف (للحظر والتخفيف) في هذه المجموعات. يمكن طلب اللوحات بشكل منفصل (Cat No. 423501) ، وتوجد تعليمات لطلاء الألواح في مجموعات وكتيبات المنتج.

هل يمكنني استخدام مكونات مختلفة من شركات مختلفة للحصول على ELISA الخاص بي؟

غالبًا ما يستخدم المصنعون المختلفون نسخًا مختلفة من الأجسام المضادة في مجموعاتهم. تحدد خصوصية الأجسام المضادة جزئيًا مقدار الإشارة التي يتم اكتشافها.

بالإضافة إلى ذلك ، قد تستخدم مجموعات مختلفة معايير البروتين المؤتلف التي تم التعبير عنها وتنقيتها باستخدام طرق مختلفة. على سبيل المثال ، يمكن للبروتينات المؤتلفة المعبر عنها في الإشريكية القولونية أن تُظهر أنشطة مناعية مختلفة بشكل أساسي بسبب عدم اتساق الانعكاس. يتم إنتاج معايير الأدوات ومعايرتها مقابل مراجع مختلفة بين الشركات المصنعة ، مما يجعل من الصعب مقارنة المكونات من مجموعات مختلفة. تم تطوير كل مجموعة BioLegend ELISA والتحقق من صحتها بتركيزات الكواشف والبروتوكولات المُحسّنة من أجل المتانة التحليلية. ستؤثر أي تغييرات على الكواشف (المعايير والأجسام المضادة ومصفوفات المطابقة) والبروتوكولات على أداء الفحص النهائي.

لماذا تختلف تركيزات السيتوكين في عيّنتي باستخدام مجموعات LEGEND MAX ™ عن مجموعات ELISA الأخرى؟

من الصعب جدًا الحصول على نفس تركيزات العينة بالضبط عند مستويات pg / ml عند مقارنة مجموعات مختلفة من السيتوكينات من بائعين مختلفين ، جزئيًا ، لأن الموردين قد يستخدمون كواشف مختلفة (بما في ذلك استنساخ الأجسام المضادة) التي لها نشاط مناعي مختلف تجاه البروتين المستهدف. ليس من غير المألوف أن يختلف تركيز السيتوكين عدة مرات بين المجموعات.

بشكل عام ، خاصة بالنسبة لتلك السيتوكينات في نطاقات pg / mL ، من المهم أن يكون لديك اتجاهات بيولوجية متطابقة بدلاً من مطابقة التركيزات المطلقة. وهذا يعني أن نفس السيتوكين الذي تم قياسه بواسطة مجموعات مختلفة من بائعين مختلفين يجب أن يُظهر نفس النمط من التغييرات البيولوجية للعلاجات ذات الصلة.

ما هو التركيز المتوقع لتحليل معين في العينات البيولوجية (على سبيل المثال في عينات مصل الحيوانات الساذجة أو البشر العاديين)؟

نظرًا لأن كل عينة فريدة من نوعها ، فمن الصعب التنبؤ بها حيث قد يعتمد ذلك على تحضير العينة وطبيعة التحليل. إذا كنت تستخدم LEGEND MAX & trade Kit ، فيرجى الرجوع إلى الدليل المعني للحصول على مزيد من المعلومات.


ما هي تركيبة المحلول المعياري المخفف القياسي في مجموعة الليبتين ELISA؟ - مادة الاحياء

النشاف الغربي هو تقنية راسخة مستخدمة في البيولوجيا الجزيئية لاكتشاف بروتينات معينة من خليط معقد من البروتينات المستخرجة من الأنسجة أو الخلايا. يتم تكوين الأجسام المضادة الاصطناعية أو المشتقة من الحيوانات والتي تتفاعل مع بروتين مستهدف محدد. تخضع مادة العينة لتمسخ البروتين ، متبوعًا بالرحلان الكهربائي للهلام. بعد ذلك ، يتم غسل غشاء الرحلان الكهربائي في محلول يحتوي على الجسم المضاد المحدد. يتم بعد ذلك غسل الجسم المضاد الزائد ، وإضافة الجسم المضاد الثانوي الذي يتفاعل مع الجسم المضاد الأول. من خلال طرق مختلفة مثل التلوين ، والتألق المناعي ، والنشاط الإشعاعي ، يمكن للجسم المضاد الثانوي أن يسمح بعد ذلك بتصور البروتين.

أ. إعداد عينة

1. استخراج البروتين

تم تحسينه على المخزن المؤقت الأساسي RIPA ، الذي يحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني ومثبطات الفوسفاتيز.

الصيغة الكلاسيكية ، هي مناسبة لمعظم التجارب المناعية لتفاعل البروتين والبروتين

البروتين من المحللة نشط ويحتفظ بالخصائص والوظائف بشكل صحيح. إنها مناسبة لـ co-IP. انقسام البروتين في حالة عدم التمسخ ، يحتفظ المنتج بخصائص البروتين ووظائفه إلى أقصى حد مناسب لـ co-IP.

ملاحظة: كاشف استخراج البروتين المحتوي على المنظفات غير مناسب لـ Bradford As s ay Kit (PC0010). حدد P الإيجار BCA Protein Assay Kit (PC0020) أو Lowry Protein As s ay Kit (PC0030).

2. قياس تركيز البروتين

سيتم تحديد محتوى البروتين من خلال مقارنة امتصاص العينة مع معامل الامتصاص المحدد من منحنى قياسي. يتم تحضير منحنى قياسي عن طريق رسم امتصاص العينات التي تحتوي على تركيزات معروفة من البروتين القياسي.

من المفترض أن يأخذ اختيار طريقة تقدير كمية البروتين في الاعتبار تأثير عوامل مثل بنية البروتين (البروتين القياسي) والمواد المتداخلة في محلول البروتين.

خففت M عند 595 نانومتر. عامل التداخل المنخفض s ، t he & # 160 & # 160 is not & # 160 disturbed & # 160 by Tris ، الكربوهيدرات ، الجلسرين ، & # 946-Mercaptoethanol ، الأمونيا ، EDTA ، إلخ.

خففت M عند 562 نانومتر. لا يعد & # 160determination & # 160 & # 160 مضطربًا & # 160 بواسطة المنظفات.

خففت M عند 650 نانومتر. هذه المجموعة مناسبة للعينات ذات المحتوى الدهني العالي. في نطاق معين ، لا يتأثر بالمنظفات

ب. إجراء تجربة WB

1. جل ص جبر الضرر

أ. تحضير هلام الفصل حسب الوزن الجزيئي للبروتين. رج العبوة ببطء حتى تختلط تمامًا ، وتجنب دخول الأكسجين عند الرج بقوة. صب الهلام المختلط بين لوحين زجاجيين ، وحقن الكحول الإيثيلي اللامائي فوقه لتجنب تأثير الأكسجين على البلمرة.

تركيز هلام الفصل (٪)

ب. تحضير محلول الجل (اختر أيًا من الخيارين التاليين)

جيل P جبر تي قادرة 1

4 & # 215 فصل المخزن المؤقت (PH8.8)

30٪ أكريلاميد / محلول ثنائي ، 29: 1

جل جبر تي قادرة 2

30٪ أكريلاميد / محلول ثنائي ، 29: 1

لراحتك ، لدينا مجموعة إعداد هلام SDS-PAGE (P1200) ومجموعة إعداد هلام Tris-Tricine-SDS-PAGE (P1320) بما في ذلك جميع الكواشف لتحضير الهلام.

لتوفير الوقت ، نحن نوفر Precast-Gel لتخطي خطوة تحضير الجل وتشغيل الرحلان الكهربائي مباشرة.

1) إن منتجنا Precast-Gel مناسب لكل من التحوير الكهربائي للهلام والرحلان الكهربي للهلام البولي أكريلاميد.

2) مقارنة مع Tris-Gly Precast-Gel ، يمكن لـ Tris-Hepes Precast-Gel تشغيل نطاقات أكثر وضوحًا ودقة أعلى.

3) ف عقد الإيجار إعداد العازلة الكهربي استخدام الطاقة p rovide d ، لا تقترح استخدام المخزن المؤقت Tris-Gly.

يتم استخدام مخزن التحميل المؤقت لكل من Native-PAGE (P1017، P 1027) و SDS-PAGE (P1015، P1016، P1017، P1018) والتي تناسب جميع احتياجاتك.

لدينا أيضًا علامات بروتين ذات مواصفات واستخدامات مختلفة لاحتياجاتك.

1) كل هذه الطرق الثلاث مناسبة لتلوين الهلام.

2) طريقة تلطيخ الفضة (G7210) أكثر حساسية من طريقة Coomassie Brilliant Blue (P1300 & P1305) ، وهي مناسبة للعينات ذات تركيز البروتين المنخفض.

3) P1300 له وقت تلطيخ أقصر من P1305

يشار إلى نقل البروتينات أو الأحماض النووية إلى الأغشية التي يسهل اختراقها باسم "النشاف" وهذا المصطلح يشمل كلاً من "الإكتشاف" (ترسيب العينة اليدوي) والنقل من المواد الهلامية المستوية. يتم عادةً نقل البروتينات التي يتم حلها على SDS-PAGE إلى دعامات غشاء ممتز تحت تأثير التيار الكهربائي في إجراء يُعرف باسم النشاف الغربي (WB) أو تنشيف البروتين.

يشتمل نظام الكشف عن لطخة ويسترن على أجسام مضادة ثانوية مقترنة بـ HRP وعامل كروموجينيك أيضًا. يوفر Sola r bio pro الكواشف ومجموعات DAB و ECL.

يمكن استخدام P0012 Ponceau S Solution ، 10 & # 215 للكشف عن كفاءة نقل الغشاء ، خاصة بالنسبة لغشاء NC.

نوفر مخزنًا عازلًا (SW3020) يمكنه جعل الغشاء نظيفًا تمامًا ويكون قادرًا على اختبار جسم مضاد آخر في نفس الغشاء.

يمكن أن يمسح Stripping Buffer الجسم المضاد دون التأثير على المستضد في الغشاء. في الواقع ، يعتبر نمط الغشاء ونوع وتركيز الجسم المضاد وخصائص المستضدات أمرًا مهمًا لكفاءة الشطف.

N ote: مناسب للكشف الغربي عن ECL وكواشف الإشعاع الكيميائي المماثلة. غير مناسب للكشف الغربي باستخدام الكواشف غير المتوهجة مثل DAB و NBT / BCIP.


مجموعة ELISA لـ Aspartate Aminotransferase (AST)

  • رقم المنتج. SEB214Ra
  • أنواع الكائنات الحية راتوس نورفيجيكوس (فأر) نفس الاسم ، أنواع مختلفة.

النوعية

يحتوي هذا الاختبار على حساسية عالية وخصوصية ممتازة للكشف عن Aspartate Aminotransferase (AST).
لم يلاحظ أي تفاعل متقاطع أو تداخل كبير بين Aspartate Aminotransferase (AST) ونظائرها.

استعادة

تم زيادة المصفوفات المدرجة أدناه بمستوى معين من Aspartate Aminotransferase المؤتلف (AST) وتم حساب معدلات الاسترداد من خلال مقارنة القيمة المقاسة بالكمية المتوقعة من Aspartate Aminotransferase (AST) في العينات.

مصفوفة نطاق الاسترداد (٪) متوسط(٪)
مصل (ن = 5) 98-105 101
EDTA بلازما (ن = 5) 91-99 96
بلازما الهيبارين (ن = 5) 84-92 88

دقة

دقة الفحص الداخلي (الدقة داخل الفحص): تم اختبار 3 عينات بمستوى منخفض ومتوسط ​​وعالي من Aspartate Aminotransferase (AST) 20 مرة على لوحة واحدة ، على التوالي.
دقة الفحص البيني (الدقة بين المقايسات): تم اختبار 3 عينات بمستوى منخفض ومتوسط ​​وعالي Aspartate Aminotransferase (AST) على 3 ألواح مختلفة ، 8 مكررات في كل لوحة.
السيرة الذاتية (٪) = SD / متوسط ​​X100
الفحص الداخلي: السيرة الذاتية

هدايا

خدمات زيادة

  • الكواشف أحادية المكون لمجموعة الفحص
  • محلول تحلل خاص بـ ELISA / CLIA
  • مراقبة جودة ELISA / CLIA
  • خدمة ELISA Kit المخصصة
  • نموذج المرض الخدمة المخصصة
  • خدمة الأمصال المخصصة
  • كاشف تنشيط TGFB1
  • الخدمة التجريبية في الوقت الحقيقي PCR
  • ستربتافيدين

إليسا: مسرد المصطلحات

يحتوي دليل أساسيات ELISA على القدر المناسب من التفاصيل لمساعدتك في التخطيط لتجربتك وتحقيق ELISA ناجحًا.

الامتزاز - التعلق السلبي للسائل على سطح صلب مكونًا غشاء رقيقًا.

مولد المضاد - مادة أو بروتين أو مركب كيميائي أو فيروس قادر على إثارة استجابة مناعية ضد الأجسام المضادة التي يتم رفعها.

AP (الفوسفاتيز القلوي) - إنزيم الفوسفاتيز الذي يزيل مجموعة الفوسفات من الركيزة. في ELISAs ، الركيزة هي p-NitroPhenyl Phosphate (pNPP).

مخفف الفحص (انظر أيضًا المخزن المؤقت) - محلول عازلة يتم فيه تخفيف العينة المراد تحليلها.

حساسية الفحص - مقياس لقدرة ELISA على التمييز بين التغيرات الصغيرة في التركيز.

خلفية - قراءة الإشارة المنسوبة إلى جميع الكواشف باستثناء المادة التحليلية. يجب أن تكون منخفضة.

حظر - تطبيق الكواشف ، المخازن المؤقتة بشكل عام ، على خلفية أقل من خلال الارتباط بمواقع الارتباط غير المحددة المحتملة للأجسام المضادة وإنزيم المتقارنات.

متعادل - المحاليل التي تحتوي على مركبات ، بشكل عام بروتينات ، لتقليل الارتباط غير النوعي للأجسام المضادة المستخدمة في الحجب لتقليل الخلفية.

تفاعلية متبادلة - جسم مضاد مرتبط بهدف مشابه جدًا ولكن ليس التحليلة المستهدفة المقصودة ، أي جزيء وثيق الصلة به تشابه بنيوي مع مولد الضد المستهدف.

حد الكشف - أصغر كمية من المادة التحليلية يمكن قياسها بشكل موثوق بواسطة مقايسة ELISA ، غالبًا ما يتم تعيينها على انحرافين معياريين (2 SD) فوق مستوى الخلفية.

التخفيف - إضافة المخزن المؤقت إلى محلول البروتين لجعله أقل تركيزًا ، ويستخدم في تحسين تركيز الجسم المضاد ولكن يتم تطبيقه أيضًا على العينات للحصول على قراءات ضمن النطاق الديناميكي للمقايسة.

مدى ديناميكي - النطاق في ELISA حيث تزداد قراءة الامتصاصية في الوضع الخطي ويمكن قياس المادة التحليلية بشكل موثوق.

تأثير الحافة - نتيجة التناقضات في إنتاج لوحات ELISA multiwell أو عندما تتسبب ظروف الفحص ، مثل لوحات التراص ، في أن تتصرف الآبار الخارجية بشكل مختلف. نتيجة لذلك ، يمكن أن تظهر قيم غير متوقعة في الآبار الخارجية والتي قد تكون خارج الخط مع البئر المجاورة. يمكن التحكم في هذا بشكل أفضل باستخدام نسخ مكررة أو ثلاث نسخ لجميع العينات ، مع ملاحظة أي اختلافات كبيرة في النتائج لعينة معينة.

تدخل غير متجانس - ينشأ من الأجسام المضادة الموجودة في العينة التي تم تحليلها بواسطة ELISA ، فهي مرتبطة بهذه الأجسام المضادة مع الجسم المضاد للكشف المستخدم في الفحص. أفضل مثال معروف على التداخل غير المتجانس هو HAMA (الجسم المضاد للفأر البشري) الموجود في بعض المرضى حيث يتداخل مع التحديد الدقيق للتحليل ، مما يُظهر قراءات إيجابية خاطئة.

HRP (الفجل الفجل بيروكسيديز) - إنزيم يفكك بيروكسيد الهيدروجين إلى ماء & ndash بيروكسيداز. تعمل الركائز الكروموجينية مثل TMB كمؤشرات على نشاط هذا الإنزيم.

تأثير الخطاف - بسبب مستويات عالية جدًا من المستضد في العينة. نتيجة لذلك ، فإن الارتباط المحدد لمولد الضد بواسطة الجسم المضاد غير كافٍ لمطابقة مستويات التحليل وتكون الإشارة أقل من المتوقع. أفضل طريقة لتجنب هذه المشكلة هي اختبار عدة تخفيفات لكل عينة.

المقايسة المناعية - أي نوع من المقايسة التي تستخدم الأجسام المضادة لقياس تركيز التحليل في عينة.

التشوش - التأثيرات على المقايسة المناعية التي تتداخل مع القياس الدقيق للمادة التحليلية (على سبيل المثال ، تأثير المصفوفة ، التداخل غير المتجانس).

تأثير المصفوفة - تأثير المركبات في العينة على قياس الحليلة.

pNPP (بارا نيتروفينيل فوسفات) - الركيزة اللونية للفوسفاتيز القلوية ، تترسب كمادة صفراء.

مثبتات البروتين - الكواشف التي تعزز الحفاظ على البنية الأصلية للبروتينات أثناء الامتصاص إلى سطح الفحص.

المادة المتفاعلة - مركب مثل pNPP و TMB يستخدم لقياس الحليلة في مقايسة مناعية.

TMB - ركيزة قياس لونية لبيروكسيداز الفجل ، تتحول إلى اللون الأزرق عند الانتهاء من التفاعل الإنزيمي.


مجموعة ELISA لـ 25-هيدروكسي فيتامين D3 (HVD3)

  • رقم المنتج. CEA915Ge
  • أنواع الكائنات الحية عموم الأنواع (عام) نفس الاسم ، أنواع مختلفة.

النوعية

يحتوي هذا الاختبار على حساسية عالية وخصوصية ممتازة للكشف عن 25-هيدروكسي فيتامين D3 (HVD3).
لم يلاحظ أي تفاعل متقاطع أو تداخل كبير بين 25-هيدروكسي فيتامين D3 (HVD3) ونظائرها.

استعادة

تم زيادة المصفوفات المدرجة أدناه بمستوى معين من 25-هيدروكسي فيتامين د 3 (HVD3) وتم حساب معدلات الاسترداد من خلال مقارنة القيمة المقاسة بالكمية المتوقعة من 25-هيدروكسي فيتامين د 3 (HVD3) في العينات.

مصفوفة نطاق الاسترداد (٪) متوسط(٪)
مصل (ن = 5) 99-105 102
EDTA بلازما (ن = 5) 78-89 85
بلازما الهيبارين (ن = 5) 93-105 98

دقة

دقة الفحص الداخلي (الدقة داخل الفحص): تم اختبار 3 عينات بمستوى منخفض ومتوسط ​​وعالي 25-هيدروكسي فيتامين D3 (HVD3) 20 مرة على لوح واحد ، على التوالي.
دقة الفحص الداخلي (الدقة بين المقايسات): تم اختبار 3 عينات بمستوى منخفض ومتوسط ​​وعالي 25-هيدروكسي فيتامين D3 (HVD3) على 3 ألواح مختلفة ، 8 مكررات في كل لوحة.
السيرة الذاتية (٪) = SD / متوسط ​​X100
الفحص الداخلي: السيرة الذاتية

هدايا

خدمات زيادة

  • الكواشف أحادية المكون لمجموعة الفحص
  • خدمة ELISA Kit المخصصة

SARS-CoV-2 مجموعة إليسا للبروتين النووي

يستخدم هذا الاختبار تقنية المقايسة المناعية لإنزيم الساندويتش الكمي. تم تغليف الجسم المضاد أحادي النسيلة الخاص بـ SARS-CoV-2 بالبروتين النووي مسبقًا على صفيحة ميكروية. يتم وضع المعايير والعينات في الآبار ، ثم يتم إضافة الجسم المضاد للكشف عن البيروكسيديز المترافق مع الفجل المخصص لـ SARS-CoV-2 إلى الآبار ، مما ينتج عنه جسم مضاد ومضاد وجسم مضاد "مجمع شطيرة". بعد خطوات الحضانة والغسيل يتم إضافة ركيزة. يتكون المنتج الملون بما يتناسب مع كمية البروتين النووي SARS-CoV-2 الموجود في العينة. The reaction is terminated by the addition of acid and absorbance is measured at 450nm. A standard curve is prepared from six SARS-CoV-2 Nucleoprotein standard dilutions and SARS-CoV-2 Nucleoprotein sample concentration determined.

TARGET INFORMATION

Coronaviruses are enveloped viruses with a positive-sense RNA genome and with a nucleocapsid of helical symmetry. Coronavirus nucleoproteins localize to the cytoplasm and the nucleolus, a subnuclear structure, in both virus-infected primary cells and in cells transfected with plasmids that express N protein. Coronavirus N protein is required for coronavirus RNA synthesis and has RNA chaperone activity that may be involved in template switch. Nucleocapsid protein is the most abundant protein of coronavirus. During virion assembly, N protein binds to viral RNA and leads to the formation of the helical nucleocapsid. Nucleocapsid protein is a highly immunogenic phosphoprotein also implicated in viral genome replication and in modulating cell signaling pathways. Because of the conservation of the N protein sequence and its strong immunogenicity, the N protein of coronavirus is chosen as a diagnostic tool.


شاهد الفيديو: تحليل مكونات الحليب تلخيص. تصنيف الأغذية حسب التركيب (قد 2022).


تعليقات:

  1. Msrah

    تم تحقيق أكبر عدد من النقاط. أعتقد أن هذا مفهوم مختلف تمامًا. أتفق معها تماما.

  2. Vugami

    أنت تبالغ.

  3. Pollock

    يبدو أن القراءة بعناية لكنني لا أفهم

  4. Eduard

    ومثله لفهم



اكتب رسالة